人脐带间充质干细胞干预急性闭塞性细支气管炎小鼠的疗效及机制

发布时间：2017-09-01 16:44

  本文关键词：人脐带间充质干细胞干预急性闭塞性细支气管炎小鼠的疗效及机制

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【摘要】：第一部分 闭塞性细支气管炎小鼠急性期模型的建立目的：探讨闭塞性细支气管炎(Bonchiolitis Oliterans, BO)小鼠急性期模型的建立方法。方法：将C57BL/6小鼠(6-8w,雄性,SPF级)随机分两组：对照组(n6)和BO组(n=6)。BO组小鼠气管内滴注2,3-丁二酮(DA)(490mg/mL即500 mg/kg)1次,对照组的气管内滴注消毒ddH2O,其余的实验条件、方法均相同。小鼠饲养于动物房(SPF级),至第3d和第7d收集支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid, BALF)、左肺组织。观察小鼠一般状态、体质量,检测气道反应性(Airway Hyper Reactivity, AHR)。BALF进行细胞计数、分类计数,左肺行HE染色。结果：BO组小鼠给予DA后1d可出现喘息、呼吸增快等表现,监测体质量显著较对照组降低(P0.05)。与对照组相比,BO组小鼠雾化Mch(浓度为50 mg/mL)时增强呼气间歇(Enhanced Pause, Penh)值明显升高(P0.05)。BO组小鼠的BALF中的炎性细胞计数显示：第3d时中性粒细胞的总数较对照组明显升高(P0.05),第7d时巨噬细胞、淋巴细胞的总数较对照组显著升高(P0.05)。HE染色显示,3d时BO组小鼠的细支气管腔内、管腔周围浸润了大量的炎性细胞,管腔闭塞严重,急性期组织出血较严重；7d BO组小鼠的基底细胞严重坏死,气道上皮细胞(Airway epithelial cells, AEC)虽然附着于基底,但可见细胞明显有增生肥大,细胞核丢失较严重,管腔内有炎性细胞浸润,管腔壁增厚,类似纤维化的表现。结论：C57BL/6小鼠给予气管内滴注DA(500 mg/kg)1次,可于第7d观察到典型的急性期BO改变,建立BO小鼠急性期模型成功。第二部分人脐带间充质干细胞干预急性闭塞性细支气管炎小鼠的疗效及机制目的：观察人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)干预BO小鼠模型的疗效及其可能机制。方法：将C57BL/6小鼠分为5组(n=8):①Control+NaCl(空白对照)组,②Control+HUC-MSC(安全性对照)组,③BO+NaCl(实验)组,④BO+HUC-MSCs(于细胞治疗)组,⑤BO+HUC-MSCs-CM(条件培养基治疗)组。每组于造模后1h分别尾静脉注入NaCl、 HUC-MSCs、HUC-MSCs-CM(总体积均为200ul)等。Dil标记HUC-MSCs,尾静脉注入,并示踪其在小鼠肺组织的分布及转移。观察一般情况,监测体质量,并于第3天和第7天收集小鼠的BALF、气管和左肺；监测肺功能；进行HE染色。组织荧光检测气管内E-cadherin、CK-5表达；细胞荧光检测HUC-MSCs中E-cadherin、CK-5的表达；Dil体外标记HUC-MSCs及体内示踪。结果:HUC-MSCs干预BO小鼠后可明显降低其死亡率(P0.05)。肺组织病理学可见BO+HUC-MSCs组、BO+HUC-MSCs-CM组于第3、7dAEC、基底细胞明显修复,肺泡及支气管周围的炎症细胞明显减少、肺泡间隔缩小,急性出血减少。气管内荧光显示：AEC的E-cadherin、 CK-5表达较实验组明显升高(P0.05)。HUC-MSCs细胞荧光可以看出其自身并不表达E-cadherin、CK-5。Dil可以在体外高效的标记HUC-MSCs, HUC-MSCs在气管内2d、肺组织4d后消失。结论：HUC-MSCs可以修复BO急性期小鼠的AEC。我们推测,可能是与其免疫调节作用相关；亦或是抑制了体内某种炎症因子的表达,干预了受损部位的微环境。
【关键词】：BO DA 小鼠 模型 HUC-MSCs BO AEC 炎症因子
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 参考文献15-16
• 第一部分 急性闭塞性细支气管炎小鼠模型的建立16-26
• 前言16
• 1 材料与方法16-19
• 2 结果19-23
• 3 讨论23-25
• 参考文献25-26
• 第二部分 人脐带间充质干细胞干预急性闭塞性细支气管炎小鼠的疗效及机制26-42
• 前言26
• 1 材料与方法26-32
• 2 结果32-38
• 3 讨论38-40
• 参考文献40-42
• 全文总结42-43
• 文献综述43-49
• 参考文献47-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间的研究成果及发表的学位论文50

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本文编号：773252