腺病毒介导的人HSP70对HPH新生大鼠HIF-1α及其调节因子和肺血管重塑作用研究

发布时间：2017-09-01 18:01

  本文关键词：腺病毒介导的人HSP70对HPH新生大鼠HIF-1α及其调节因子和肺血管重塑作用研究

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【摘要】：目的:通过免疫组化方法探讨人热休克蛋白70(HSP70)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉压力、肺血管重塑以及HIF-1a、ET-1、iNOS的作用。方法:将128只Wistar新生大鼠按随机数字表法分为HPH组和对照组(C组),根据转染液不同将HPH组再分为盐水组(H1组)、空病毒组(H2组:标有绿色荧光信号但未携带目的基因的病毒载体)和病毒+HSP70组(H3组:标有绿色荧光信号同时携带目的基因的病毒载体)。缺氧建模3、7、10、14d检测各组新生大鼠的肺动脉压力(mPAP)及肺血管重塑指标(MT%、MA%),并测定肺血管HSP70、HIF-1a、ET-1、iNOS免疫组化强度。结果:缺氧3、7、10d时,盐水组和空病毒组HSP70表达较对照组增强(P0.01),病毒+HSP70组HSP70表达高于其余三组(P0.01),缺氧14d时各组间HSP70表达差异无统计学意义(P0.05)。缺氧3、7、10d时,盐水组和空病毒组新生大鼠mPAP高于对照组(P0.05),病毒+HSP70组新生大鼠mPAP与对照组比较未见明显增高(P0.05);缺氧14d时,HPH组新生大鼠mPAP比较差异无统计学意义(P0.05),但均明显高于对照组(P0.05)。缺氧7、10d盐水组和空病毒组MT%、MA%明显高于对照组(P0.05),病毒+HSP70组较对照组差异无统计学意义(P0.05);缺氧14d时,HPH组MT%、MA%比较差异无统计学意义(P0.05),但均明显高于对照组(P0.05)。缺氧3、7、10d HPH组肺组织HIF-1α及ET-1表达均强于对照组(P0.01),其中病毒+HSP70组HIF-1α及ET-1表达低于盐水组和空病毒组(P0.01),但在盐水组和空病毒组间比较差异无统计学意义(P0.05);缺氧14d时各组间HIF-1α及ET-1表达强度比较差异无统计学意义(P0.05)。缺氧3、7、10d盐水组、空病毒组、病毒+HSP70组肺组织iNOS表达均强于对照组(P0.01),其中缺氧3、7d病毒+HSP70组iNOS表达低于盐水组和空病毒组(P0.01),但在盐水组和空病毒组间比较差异无统计学意义(P0.05);缺氧10d,病毒+HSP70组iNOS表达低于空病毒组(P0.01),HPH组间比较差异无统计学意义;缺氧14d时各组间iNOS表达强度比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:腺病毒介导的HSP70在大鼠肺组织高效表达后,降低HIF-1a及其下游靶基因ET-1、iNOS的表达,降低缺氧性肺动脉高压新生Wistar大鼠的肺动脉压力,减轻肺血管重塑。
【关键词】：肺动脉高压 热休克蛋白70 新生大鼠
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 导师评阅表3-6
• 中英文缩略词对照表6-10
• 摘要10-12
• Abstract12-14
• 前言14-15
• 研究内容与方法15-23
• 1. 研究对象15
• 1.1. 动物伦理15
• 1.2. 入选标准15
• 1.3. 排除标准15
• 1.4. 样本含量的计算15
• 2. 主要仪器及试剂15-16
• 2.1. 主要仪器15
• 2.2. 主要试剂15-16
• 3. 实验方法16-21
• 3.1. 分组16-17
• 3.2. 平均肺动脉压力的测定17
• 3.3. 腺病毒定位在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织判断17-18
• 3.4. 肺血管重塑指标的检测18
• 3.5. 肺组织HSP70、HIF-a、iNOS免疫组化18
• 3.6. 石蜡切片的制作程序18-19
• 3.7. 电镜观察标本的制作19
• 3.8. HE染色程序19-20
• 3.9. VG染色20
• 3.10. 免疫组化20-21
• 4. 质量控制21
• 4.1. 肺动脉压检测过程中质量控制21
• 4.2. 标本采集及病理染色过程中的质量控制21
• 4.3. 实验数据统计分析过程中的质量控制21
• 5. 统计学分析21-22
• 6. 技术路线图22-23
• 结果23-31
• 1. 腺病毒在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织中的定位23
• 2. 免疫组化法检测肺组织HSP70的表达及反应强度比较23-24
• 3. 腺病毒介导HSP70缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉压力比较24-25
• 4. 光学显微镜观察肺血管结构的变化25-26
• 5. 电镜下新生大鼠肺动脉超微结构的变化26-27
• 6. 肺动脉血管重塑指标比较27-28
• 7. 腺病毒介导的HSP70转染至新生大鼠肺组织中HIF-1α、ET-1、iNOS的免疫组化表达强度比较28-31
• 7.1. HIF-1α的免疫组化表达强度比较28-29
• 7.2. ET-1 的免疫组化表达强度比较29
• 7.3. iNOS的免疫组化表达强度比较29-31
• 讨论31-37
• 1. 腺病毒介导的热休克蛋白70在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织中HSP70免疫强度的表达31-32
• 2. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉压力的影响32
• 3. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺血管结构的影响32-33
• 4. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠中HIF-1a的影响33-35
• 5. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠HIF-1α下游靶基因（ET-1、iNOS）的影响35-36
• 6. 本研究创新点36
• 7. 本研究不足之处36
• 8. 展望36-37
• 小结37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-44
• 综述44-53
• 参考文献48-53
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文53

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本文编号：773562