轻症或重症手足口病患儿HEV71分离鉴定及其VP1基因型分析

发布时间：2017-09-14 02:49

  本文关键词：轻症或重症手足口病患儿HEV71分离鉴定及其VP1基因型分析

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【摘要】：背景：人肠道病毒71型(human enterovirus 71,HEV71)为肠道病毒A组单股正链RNA病毒,是手足口病(hand-foot-and-mouth disease, HFMD)主要病原体。HEV71壳粒由VP1-VP4四种病毒蛋白组成,其中VP1具有细胞受体结合位点、中和抗体表位及抗病毒药物结合位点,故VP1在病毒感染、抗病毒免疫应答及药物治疗效果等方面有重要作用。若VP1功能相关重要位点发生突变,可使HEV71毒力和耐药性发生改变,从而对HFMD患者病情严重程度产生较大影响。HEV71的VP1序列中有一个微小RNA病毒衣壳蛋白样(picornavirus capsid protein domain-like, rhv_like)功能结构域(domain),该结构域含有9个药物结合位点。根据VP1序列差异,HEV71可分为A、B0～5和C1～5基因型,不同地区流行的主要HEV71-VP1基因型可有差异。因此,了解不同地区优势流行的HEV71 VP1基因型及其rhv_like结构域中药物结合位点突变对于HFMD防控及治疗均有较大意义。目的：从不同病情HFMD患儿中分离鉴定HEV71并分析其VP1基因型及rhv_like结构域中药物结合位点突变情况。方法：从2014年浙江省绍兴地区4例轻症和4例重症HFMD患儿标本中分离HEV71并用RT-PCR进行鉴定。采用RT-PCR扩增病毒分离株全长VPl基因并测序。采用专业生物信息学软件,对HEV71分离株进行VP1基因分型、确定VP1基因rhv like结构域中药物结合位点突变情况并构建HEV71分离株系统进化树。结果：HEV和HEV71 RT-PCR检测结果显示,8例HFMD患儿标本中分离的病毒均为HEV71。与GenBank中HEV71参考标准株VP1基因各基因型序列比较,8例HFMD患儿标本中分离的HEV71株VP1基因核苷酸及氨基酸序列均与C4a基因型相似性最高,分别为97.2%～98.8%和99.3%～99.7%。2株分离自2例重症HFMD患儿HEV71株VP1基因hv_like结构域中第179位药物结合位点出现V179L突变。与国内外不同地区HEV71分离株VP1基因比较,5株HEV71分离株与安徽和湖南分离株亲缘关系较近,3株HEV71分离株与上海和山东分离株亲缘关系较近。结论：本地区不同病情HFMD患儿分离的HEV71均为VP1-C4a基因型,重症患儿HEV71分离株VP1基因rhv_like结构域中第179位药物结合位点突变可能与病情严重程度有关。
【关键词】：手足口病 人肠道病毒71型 VP1基因 基因分型 微小RNA病毒衣壳蛋白样功能结构域 药物结合位点 突变
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.1
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 1 引言12-15
• 1.1 背景12-13
• 1.2 研究目的与意义13-15
• 2 HEV和HEV71的RT-PCR检测15-19
• 2.1 材料15-16
• 2.2 方法16-17
• 2.3 结果17-19
• 3 HEV71的分离与鉴定19-23
• 3.1 材料19-20
• 3.2 方法20-21
• 3.3 结果21-23
• 4 HEV71-VP1基因的扩增及序列测定23-30
• 4.1 材料23
• 4.2 方法23-24
• 4.3 结果24-30
• 5 HEV71-VP1基因型分析和突变分析30-37
• 5.1 材料30
• 5.2 方法30
• 5.3 结果30-37
• 6 讨论37-39
• 参考文献39-43
• 综述43-64
• 参考文献55-64
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果64

【参考文献】

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1 翁育伟;严延生;;肠道病毒71型研究进展[J];中国人兽共患病学报;2014年01期

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本文编号：847436