普萘洛尔治疗婴儿血管瘤分子机制的研究

发布时间：2017-09-15 08:20

  本文关键词：普萘洛尔治疗婴儿血管瘤分子机制的研究

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【摘要】：目的:血管瘤是婴儿最常见的良性肿瘤。2008年发现普萘洛尔治疗血管瘤以来,已成为血管瘤的一线治疗药物,但其作用的机制仍然不清楚。本课题主要通过研究普萘洛尔对体外培养的血管瘤内皮细胞(Hem EC)增殖及凋亡的影响;同时采用人表达谱芯片研究普萘洛尔干预前后血管瘤内皮细胞基因表达差异,寻找普萘洛尔的作用靶点,从而探讨普萘洛尔治疗血管瘤的分子机制。方法:1、普萘洛尔的药物作用效果实验:体外培养婴幼儿的Hem EC,同时培养脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)作为对照,以不同浓度的普萘洛尔处理两种细胞(0 umol/L、25 umol/L、50umol/L、75umol/L、100umol/L、125umol/L),24、48、72h后以MTT细胞增殖试剂盒检查两种细胞的存活率。同时以同样方法处理Hem EC后采用Annexin V法用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;2、c DNA芯片实验:提取普萘洛尔干预组及空白对照组Hem EC的总RNA,安捷伦c DNA微阵列扫描仪扫描芯片收集数据,经分析得出药物作用后差异表达的基因。挑选部分差异显著的基因,用Real-time PCR进行验证。结果:1、普萘洛尔浓度为25umol/L,作用24h、48h,可引起Hem EC轻微增殖(p0.05);普萘洛尔浓度≥100umol/L,作用时间≥24h可引起Hem EC存活率下降,且在一定范围内药效与药物浓度、作用时间呈正相关(p0.05)。普萘洛尔浓度≥100umol/L,作用时间≥48h可引起HUVEC存活率下降,且在一定范围内药效与药物浓度、作用时间呈正相关(p0.05);普萘洛尔浓度≥100umol/L,Hem EC与HUVEC相比对药物的抑制作用更加敏感,存活率更低(p0.05);2、普萘洛尔浓度≥100 umol/L,能引起Hem EC的凋亡,且随着药物浓度增高及干预时间延长,细胞凋亡率越高(p0.05);3、c DNA芯片筛选普萘洛尔干预Hem EC前后基因表达差异倍数≥1.5倍的共有186个,其中表达明显上调的基因有128个,表达明显下调的基因58个;其中PCSK9、FABP3基因表达显著上调,分别达到3.22倍与10.54倍;经Real-time PCR验证,普萘洛尔干预后,Hem EC的PCSK9、FABP3m RNA表达显著提高,分别达到干预前的9.88土2.19倍,21.9土8.18倍;结论:1、低浓度普萘洛尔对Hem EC的增殖有促进作用;高浓度普萘洛对Hem EC及HUVEC的增殖有抑制作用,且呈一定的浓度与时间依赖性;Hem EC与HUVEC相比对普萘洛尔抑制作用更加敏感。2、普萘洛尔抑制血管瘤的增长可能与抑制Hem EC增殖及促进其凋亡有关。3、普萘洛尔干预Hem EC前后存在明显的差异基因表达,这些基因与细胞凋亡、细胞代谢、细胞周期、生长调控、信号传导、类固醇合成、脂类生物合成等有关。4、普萘洛尔引起Hem EC凋亡可能与上调PCSK9、FABP3m RNA的表达有关。
【关键词】：婴儿血管瘤 普萘洛尔 基因芯片 PCSK9 FABP3
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R732.2
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 英文缩略词表11-12
• 前言12-16
• 第一章 普萘洛尔对体外培养血管瘤内皮细胞增殖和凋亡的影响16-42
• 1.1 实验一、体外血管瘤内皮细胞的培养、鉴定16-24
• 1.1.1 实验仪器、材料16-17
• 1.1.2 实验试剂17-18
• 1.1.3 实验方法18-21
• 1.1.4 实验结果21-24
• 1.2 实验二、普萘洛尔干预后血管瘤内皮细胞的存活率24-31
• 1.2.1 实验材料、仪器24
• 1.2.2 实验试剂24
• 1.2.3 实验方法24-25
• 1.2.4 统计分析25
• 1.2.5 实验结果25-31
• 1.3 实验三、普萘洛尔干预后血管瘤内皮细胞的凋亡率31-37
• 1.3.1 实验材料、仪器31
• 1.3.2 实验试剂31
• 1.3.3 实验方法31-32
• 1.3.4 统计分析32
• 1.3.5 实验结果32-37
• 1.4 讨论37-40
• 1.4.1 血管瘤内皮细胞体外培养37-38
• 1.4.2 普萘洛尔抑制血管瘤内皮细胞增殖、促进其凋亡38-40
• 1.5 结论40-42
• 第二章 采用基因芯片技术研究普萘洛尔治疗血管瘤机制42-66
• 2.1 实验一、普萘洛尔干预血管瘤内皮细胞后的cDNA芯片检测42-54
• 2.1.1 实验材料、仪器42
• 2.1.2 主要试剂42-43
• 2.1.3 实验方法43-47
• 2.1.4 实验结果47-54
• 2.2 实验二普萘洛尔干预血管瘤内皮细胞前后PCSK9、FABP3 mRNA的表达差异54-61
• 2.2.1 实验材料、仪器54
• 2.2.2 实验方法54-57
• 2.2.3 实验结果57-61
• 2.3 讨论61-64
• 2.4 结论64-66
• 参考文献66-72
• 综述72-80
• 参考文献77-80
• 攻读硕士期间的主要研究成果80-82
• 致谢82

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本文编号：855371