乳铁蛋白对脂多糖激活的U937细胞TLR4信号通路相关膜分子表达的影响

发布时间：2017-09-16 23:15

  本文关键词：乳铁蛋白对脂多糖激活的U937细胞TLR4信号通路相关膜分子表达的影响

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【摘要】：【目的】本研究旨在从蛋白质和mRNA水平探索重组人乳铁蛋白（Recombinant human lactoferrin，rhLF）对脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）活化的人单核巨噬细胞株U937细胞Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR4）通路相关膜分子TLR4、CD14及MD2表达的影响。 【方法】1、U937细胞经10ng/ml佛波酯（Phorbol12-myristate13-acetate，PMA）诱导分化成熟后分为三个组，即正常对照组，LPS组（LPS100ng/ml）和rhLF干预组（给予LPS100ng/ml＋不同浓度的rhLF50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，500μg/ml）；2、应用逆转录PCR方法分别检测各组细胞TLR4、CD14及MD2mRNA的表达水平；3、应用western免疫印迹方法分别检测各组细胞TLR4、CD14及MD2蛋白质的表达水平。 【结果】1、采用10ng/ml PMA刺激U937细胞24h后，细胞停止增殖，，伸出伪足，变为呈聚集性生长的贴壁细胞，呈典型的巨噬细胞形态；2、经PMA诱导的正常对照组U937细胞有一定基础量的TLR4、CD14及MD2mRNA表达，给予LPS刺激后三者的mRNA表达水平显著上调（P＜0.05）；TLR4、CD14及MD2mRNA在50μg/ml rhLF干预组的表达水平与LPS组比较不存在统计学差异（P＞0.05）；100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml rhLF干预组呈浓度依赖性地降低了TLR4、CD14国家级临床重点专科，重庆市重点学科建设项目(编号：2010-53)及MD2mRNA的表达水平（P＜0.05）；3、经PMA诱导的正常对照组的U937细胞有一定基础量的TLR4、CD14及MD2蛋白质表达，给予LPS刺激后三者的蛋白质表达是水平显著上调（P＜0.05）；TLR4、CD14及MD2蛋白质在50μg/ml rhLF干预组的表达水平与LPS组比较不存在统计学差异（P＞0.05）；100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml rhLF干预组呈浓度依赖性地降低了TLR4、CD14及MD2蛋白质的表达水平（P＜0.05）；TLR4、CD14及MD2三者蛋白质的表达水平变化趋势与mRNA的表达水平变化趋势一致。 【结论】1、U937细胞经10ng/ml PMA诱导后分化成为贴壁的巨噬细胞；2、未给予LPS刺激的正常对照组U937细胞即有一定基础量的TLR4、CD14及MD2mRNA和蛋白质表达；3、在给予LPS刺激活化U937细胞后，TLR4、CD14及MD2三者mRNA和蛋白质的表达均显著上调，提示TLR4信号通路相关膜分子TLR4、CD14及MD2的表达可能与TLR4跨膜信号转导通路激活引发的过度放大炎症反应密切相关，这为防治脓毒症的发生发展提供了重要思路；4、rhLF干预组呈浓度依赖性地降低了TLR4、CD14及MD2三者mRNA和蛋白质的表达，推测LF可通过下调TLR4信号通路相关膜分子TLR4、CD14及MD2的表达水平，参与抑制细胞下游级联放大的炎症信号传递，减轻内毒素的损伤效应；这是对LF有效抑制脓毒症引起的过度免疫反应机制的进一步补充，也为LF在治疗新生儿脓毒症中的应用提供新的理论基础。
【关键词】：乳铁蛋白 脂多糖 U937细胞 Toll样受体4 CD14 髓样分化蛋白2
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-24
• 2 结果24-30
• 3 讨论30-33
• 全文小结33-34
• 参考文献34-38
• 文献综述38-45
• 参考文献41-45
• 致谢45-46
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文46-47

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本文编号：865853