肠道病毒71感染人肠道上皮细胞所致宿主细胞反应的研究

发布时间：2017-09-17 12:03

  本文关键词：肠道病毒71感染人肠道上皮细胞所致宿主细胞反应的研究

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【摘要】：肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)属于小核糖核酸病毒科、肠道病毒属的单股正链无包膜RNA病毒。临床上可以引起婴幼儿手足口病和严重的神经系统疾病,目前其致病机制还不清楚,有待于更深一步的研究。研究报道人肠道上皮是EV71的起始复制位点,但临床上常无消化道症状或者症状轻微,可能是EV71在肠道上皮细胞中有独特的免疫应答机制。然而几乎没有这方面的相关研究和报道。本次研究中,我们证明EV71能感染人肠道上皮细胞HT29,并且观察到被感染的细胞有明显的细胞病变反应(cytopathic effects, CPEs)。我们发现,在EV71感染人肠道上皮细胞后,TLR-7和TLR-8被明显诱导,可能在宿主抗EV71固有免疫应答和干扰素p的诱导中起关键作用；炎性细胞因子IL-6, CCL5和IP10被显著上调,可能在宿主炎症反应中起重要作用。我们检测到在EV71感染的HT29细胞中,caspase-8和caspase-9都被激活,并且伴随着线粒体细胞色素C的释放和caspase-3的激活。这表明肠道上皮细胞的凋亡可能是经由死亡受体介导的外源性凋亡途径和线粒体介导的内源性凋亡途径双重激活的；并且内源性凋亡通路可能是通过激活的caspase 8将Bid切割成tBid,而激活内源性通路。我们还观察到,凋亡因子FasL和TNF-α表达明显上调,而TRAIL表达上调则不明显,说明FasL和TNF-α可能是外源性凋亡途径的主要启动因子。EV71感染肠道上皮细胞后,诱导了大量干扰素p的表达以及ISG54和ISG56的明显上调,可能是宿主抗病毒的主要因子。而感染EV71后病人消化道症状轻微可能是由于足量的干扰素被诱导、引起局部抗病毒应答的结果。在部分病人中症状严重,且中枢神经系统累及,则可能是因为这些病人由于免疫系统发育不成熟或遗传差异,而不能在肠道局部有效诱导干扰素表达,因而不能刺激抗病毒应答,结果导致病毒向中枢神经系统扩散。本研究首次证明人肠道上皮细胞对EV71的宿主抗病毒免疫不同于其他组织细胞,这也可能是肠道症状轻微的原因之一。本研究结论将加深我们对EV71感染的致病机制和宿主防御机制的认识和理解。
【关键词】：肠道病毒71型 EV71 肠道上皮细胞 细胞凋亡 固有免疫
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.1
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 第一章 肠道病毒71的系统进化分析11-22
• 前言11-14
• 实验方法14-15
• 结果与分析15-21
• 讨论21-22
• 第二章 肠道病毒71感染人肠道上皮细胞所致宿主细胞反应的研究22-43
• 前言22-25
• 实验材料与方法25-30
• 结果与分析30-40
• 讨论40-43
• 论文综述 肠道病毒71感染引起宿主固有免疫应答的研究进展43-51
• 参考文献51-57
• 附录1 PCR中所用引物序列57-59
• 附录2 中英文全称及缩写59-61
• 附录3 在校期间撰写及发表论文61-62
• 致谢62-63

【共引文献】

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本文编号：869274