RELMβ对人脐静脉内皮细胞血管形成活性的影响及机制研究

发布时间：2017-09-17 16:37

  本文关键词：RELMβ对人脐静脉内皮细胞血管形成活性的影响及机制研究

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【摘要】：目的：探讨转染RELMβ对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及血管形成的影响。 方法：采用脂质体介导方法，将RELMβ真核表达载体转染入人脐静脉内皮细胞，实验分组为空白对照组（Control）、空载体转染组（Vector）及目的质粒组（RELMβ），采用MTT（四甲基偶氮唑盐酶反应）比色法、EdU（5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷）掺入法检测细胞增殖活性，Transwell实验检测细胞的迁移，小管形成实验检测血管生成活性。 结果：在HUVEC细胞系中，与空白对照组相比，空载体转染组细胞增殖率、细胞迁移数目及血管形成能力均无显著性差异（P0.05）；MTT比色法显示RELMβ转染组HUVEC细胞增殖率下降了48.3%（P0.05）；EdU掺入法显示：转染RELMβ48h后，HUVEC细胞增殖率下降了25%（P0.05）；Transwell实验结果显示：RELMβ转染组穿越细胞数目比空白对照组下降了65%（P0.05）；小管形成实验结果表明：RELMβ转染组细胞的血管生成能力显著下降，生成血管的直径较小且成环率降低。 结论：转染RELMβ基因能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移及血管形成。 目的：探讨重组RELMβ蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及血管形成的影响。 方法：运用重组RELMβ蛋白直接干预人脐静脉内皮细胞，，实验分组为：空白对照组（Control）、溶剂对照（BSA）组、重组RELMβ蛋白组（10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）。采用MTT比色法、EdU掺入法检测细胞增殖活性，Transwell实验检测细胞的迁移，小管形成实验检测血管生成活性。 结果：在HUVEC细胞系中，与空白对照组相比，BSA组细胞增殖率、细胞迁移数目及血管形成能力均无显著性差异（P0.05），而RELMβ组均有不同程度的下降。MTT比色法显示：10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml RELMβ处理HUVEC细胞后，细胞增殖率分别下降8%（P0.05）、19.3%（P0.05）、22.5%（P0.05）；EdU掺入法显示10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml RELMβ处理组细胞增殖率分别下降16..4%（P0.05）、23.3%（P0.05）、25.4%（P0.05）；Transwell实验结果显示：10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml RELMβ处理HUVEC细胞后，细胞迁移能力分别下降了13.5%（P0.05）、34.6%（P0.05）、56.5%（P0.05）；小管形成实验显示：10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml RELMβ处理组细胞的血管生成能力显著下降，生成血管的直径较小且成环率明显降低。 结论：重组RELMβ蛋白能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移及血管形成。 目的：探讨RELMβ抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及血管形成的机制。 方法：运用重组RELMβ蛋白直接干预人脐静脉内皮细胞，实验分组为：空白对照组（Control）、溶剂对照（BSA）组、重组RELMβ蛋白组（10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）。采用Werstern blot法检测细胞内VEGF的表达，实时定量PCR检测检测血管内皮生长因子（VEGF）受体的表达水平。 结果：在HUVEC细胞系中，与空白对照组相比，BSA组的VEGF及其受体KDR、FLT-1表达均无显著性差异（P0.05）。10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml RELMβ处理HUVEC细胞后，Western blot结果显示10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlRELMβ处理HUVEC细胞后，VEGF蛋白表达分别下调11.8%（P0.05）、41.6%（P0.05）、67.2%（P0.05）；实时定量PCR显示细胞内KDR表达水平分别显著升高3.05倍（P0.05）、1.5倍（P0.05）、1.42倍（P0.05），FLT-1表达水平分别显著升高4.3倍（P0.05）、1.63倍（P0.05）、1.75倍（P0.05）；。 结论：RELMβ能下调人脐静脉内皮细胞中VEGF的表达，但上调VEGF受体KDR和FLT-1的表达，其表达调控机制有待进一步研究。
【关键词】：抵抗素样分子β 人脐静脉内皮细胞 增殖 迁移 血管生成 抵抗素样分子β 人脐静脉内皮细胞 增殖 迁移 血管生成 抵抗素样分子β 人脐静脉内皮细胞 血管内皮生长因子 血管生成
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.4
【目录】：

• 缩略词表5-7
• 研究背景7-12
• 参考文献10-12
• 中文摘要12-15
• Abstract15-18
• 第一部分 转染 RELMΒ对人脐静脉内皮细胞血管形成活性的影响18-32
• 实验材料18-19
• 实验方法19-24
• 结果24-28
• 讨论28-30
• 参考文献30-32
• 第二部分 重组 RELMΒ蛋白对人脐静脉内皮细胞血管形成活性的影响32-44
• 实验材料32-33
• 实验方法33-37
• 结果37-41
• 讨论41-43
• 参考文献43-44
• 第三部分 RELMΒ抑制人脐静脉内皮细胞血管生成的分子机制研究44-58
• 实验材料44-47
• 实验方法47-52
• 结果52-54
• 讨论54-57
• 参考文献57-58
• 研究小结58-59
• 综述59-69
• 参考文献65-69
• 参与课题情况69-70
• 攻读硕士学位期间发表论文目录70-71
• 致谢71-72

【共引文献】

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本文编号：870515