胰高血糖素样肽-2对新生大鼠坏死性小肠结肠炎保护作用机制的研究
本文关键词：胰高血糖素样肽-2对新生大鼠坏死性小肠结肠炎保护作用机制的研究
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【摘要】：目的:建立新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型,研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对NEC新生大鼠肠组织病理损伤和肠组织内Caspase-3蛋白表达的影响,探讨GLP-2对NEC的保护作用及其机制,为GLP-2应用于人类NEC的防治提供理论依据。实验对象与方法:1.实验动物:24只3日龄新生SD大鼠,雌雄不限,随机分为正常对照组、NEC模型组、GLP-2干预组,每组8只。2.NEC模型的建立:新生SD大鼠3日龄时置于自制保暖箱内,给予鼠乳代乳品人工喂养,每4小时1次,脂多糖(LPS)溶液灌胃一日1次,建立NEC大鼠模型。3.实验方案:正常对照组:出生3日后继续与母鼠同笼,鼠乳喂养,自由采食,不做干预。NEC模型组:建立NEC模型,同时每天给予生理盐水5ml/Kg皮下注射,每12小时1次。GLP-2干预组:建立NEC模型,同时给予GLP-2 250ug/Kg次皮下注射,每12小时1次。4.标本采集及处理:所有大鼠最后一次喂养后禁食12小时,断颈处死,取十二指肠至肛门的所有肠组织,观察肠组织大体形态。取回肠末段肠组织,磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗干净后,于4%多聚甲醛溶液固定,石蜡包埋,制备3μm的连续切片,HE染色进行肠组织病理评分;免疫组织化学染色检测肠道内Caspase-3蛋白的表达情况,并测量其累积光密度值(IOD)。5.观察指标:每天定时称量各只大鼠体重,观察一般情况如皮肤颜色、体温、对刺激反应、活动度、有无吐奶及腹胀等,并记录。6.统计分析:使用SPSS 23.0统计软件进行统计学分析,以P0.05为差异有统计学意义。结果:1.一般情况正常对照组大鼠皮肤颜色粉红,每天进食正常,无吐奶、腹胀,活动度良好,对刺激反应好;NEC模型组大鼠造模24小时即出现皮肤颜色变白,吐奶、胃潴留、腹胀,精神萎靡,活动减少,对刺激反应差,严重者可出现青紫、低体温等;GLP-2干预组大鼠上述症状于24小时至48小时出现,且相对轻。2.体重变化正常对照组、NEC模型组、GLP-2干预组新生大鼠实验前后的体重变化(g)分别为1.63±0.34、-0.75±0.10、-0.30±0.08。NEC模型组及GLP-2干预组大鼠体重变化均为负值,提示体重呈负增长。NEC模型组、GLP-2干预组与正常对照组实验前后的体重变化比较,均具有统计学差异(P0.05),NEC模型组与GLP-2干预组实验前后的体重变化比较,具有统计学差异(P0.05)。3.肠组织大体形态正常对照组:肠管呈淡黄色,光泽度好,弹性好,无积气;肠壁无充血或/和出血。NEC模型组:肠管呈黄红色,光泽度差,弹性差,积气明显;肠壁充血、出血。GLP-2干预组:肠道颜色介于两组之间,充血和积气程度较模型组轻。4.肠组织病理评分结果正常对照组、NEC模型组、GLP-2干预组大鼠肠组织病理评分(单位:分)分别为0.25±0.80、2.87±0.92、1.57±0.53。正常对照组与GLP-2干预组相比,肠组织病理学评分的差异无统计学意义(P㧐0.05),NEC模型组与正常对照组及NEC模型组与GLP-2干预组比较,肠组织病理学评分的差异均有统计学意义(P0.05)。5.NEC的发生率NEC的发生率依次为:NEC模型组(75.00%)㧐GLP-2干预组(37.5%)㧐正常对照组(0.00%)。6.Caspase-3蛋白的IOD值结果正常对照组、NEC模型组、GLP-2干预组大鼠的IOD值分别为21057.00±1417.64、83730.00±2330.22、42360.00±1835.15。NEC模型组与正常对照组、GLP-2干预组IOD值分别比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。GLP-2干预组与正常对照组IOD值比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.人工喂养+LPS灌胃可以成功建立新生SD大鼠NEC模型,方法简单易行。2.细胞凋亡在NEC发病过程中发挥重要作用。3.GLP-2能够减轻NEC新生大鼠的临床表现和肠道病理损伤程度。4.通过减少Caspase-3蛋白的表达抑制细胞凋亡可能是GLP-2对新生大鼠坏死性小肠结肠炎保护机制之一。5.GLP-2可能在新生儿NEC防治中具有临床应用价值,尚需进一步研究。
【关键词】：胰高血糖素样肽-2 新生大鼠 坏死性小肠结肠炎 Caspase-3 细胞凋亡
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R722.1
【目录】：
- 英文缩略词表5-6
- 中文摘要6-9
- 英文摘要9-12
- 引言12-14
- 实验材料与方法14-19
- 统计分析19
- 实验结果19-26
- 讨论26-29
- 结论29-30
- 本研究的局限性及展望30-31
- 参考文献31-36
- 附录36-37
- 致谢37-38
- 综述38-46
- 参考文献43-46
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