rhEPO对NEC新生大鼠肠道Bcl-2及Caspase-3蛋白表达的影响

发布时间：2017-09-19 11:20

  本文关键词：rhEPO对NEC新生大鼠肠道Bcl-2及Caspase-3蛋白表达的影响

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【摘要】：目的：研究口服不同剂量重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)对新生大鼠坏死性小肠结肠炎Bcl-2(B-cell lymphoma-2)、 caspase-3(cysteine protease-3)蛋白表达及肠道病理损伤的影响,探讨rhEPO对新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enteroeolitis, NEC)的肠道保护作用机制,为应用rhEPO防治新生儿坏死性小肠结肠炎提供科学依据。 方法：从出生48h不同窝别的新生SD大鼠中随机挑选60只,雌雄不限,体重5-10g,随机分为五组,每组12只。正常对照组：出生48h后继续与母鼠同笼,母鼠鼠乳喂养,不做任何干预。NEC模型组：出生48h后与母鼠分离,采用鼠乳代乳品人工喂养,并定时给予缺氧冷刺激,连续3天,建立NEC模型。其余三组是在建模的同时给予rhEPO进行干预,根据在鼠乳代乳品中加入的rhEPO的浓度的不同(O.lU/ml、1U/ml及10U/ml),分别将三组命名为干预1组、干预2组及干预3组。采用免疫组化(二步法)检测大鼠肠道Bcl-2及活性caspase-3蛋白情况,采用图像分析系统对免疫组化的图像进行阳性表达积分光密度值(integral optical density, IOD)测量。SPSS11.5统计软件进行统计分析,P0.05为差异有统计学意义。 结果：1.临床表现正常对照组新生大鼠每天进食正常,无腹胀,生长发育良好,活动良好；NEC模型组大鼠造模24小时后就相继出现腹胀、活动减少、反应迟钝,严重者出现皮肤苍白、皮温降低、呼吸节律改变,三组EPO干预组上述症状出现较晚且较轻。2.体重差值变化各组新生大鼠体重差值为(g)：正常对照组为(1.62±0.70),NEC模型组为(-0.49±0.25),干预1组为(-0.23±0.25),干预2组为(-0.274±0.16),干预3组为(-0.28±0.35)。NEC模型组与正常对照组比较,新生大鼠体重差值呈负增长,且差异有统计学意义(a’=0.005,P-0.005)；三组干预组分别与NEC模型组比较,新生大鼠体重差值负增长程度明显减轻,差异均有统计学意义(a'=0.005,P0.005)；三组干预组间两两比较,除干预1组与干预2组间新生大鼠体重差值差异无统计学意义外(a'=0.005,P0.005),干预3组与干预1组、干预2组相比较,新生大鼠体重差值负增长程度均明显减轻,且差异有统计学意义(a'=0.005,P≤0.005)。3.新生大鼠存活率各组新生大鼠存活率为：正常对照组100%(12/12),NEC模型组83.3%(10/12),干预1组83.3%(10/12),干预2组91.7%(11/12),干预3组91.7%(11/12)。4.肠道组织病理学评分及NEC发病率各组新生大鼠肠道组织病理评分分别为：NEC模型组肠道组织病理学评分比正常对照组明显增高,且差异有统计学意义(a'=0.005,P0.005)；三组干预组与NEC模型组相比较,除干预1组与NEC模型组相比较差异无统计学意义外(a'=0.005,P10.005),干预2组、干预3组肠道组织病理学评分均低于NEC模型组,且差异均具有统计学意义(a'=0.005,P0.005)。三组干预组间两两比较,肠道组织病理学评分差异均无统计学意义(a'=0.005,P0.005)。各组新生大鼠NEC发病率为：正常对照组0%,NEC模型组60%,干预1组30%,干预2组18.2%,干预3组9.1%。EPO给药剂量与新生SD大鼠的NEC发病率之间存在负相关关系(rs=-I,P0.01)。5.肠道Bel-2表达及活性caspase-3蛋白积分光密度值NEC模型组与正常对照组相比较,肠道Bcl-2表达积分光密度值差异无统计学意义(a'=0.005,P0.005)；三组干预组肠道Bcl-2表达积分光密度值与NEC模型组比较均明显增加,差异有统计学意义(a'=0.005,P0.005)；三组干预组间两两比较,除干预1组与干预2组之间的差异无统计学意义外(a'=0.005,P0.005),干预3组肠道Bcl-2表达积分光密度值与干预1组及干预2组相比,均明显增加,且有统计学意义(a'=0.005,P0.000)。NEC模型组肠道活性caspase-3蛋白积分光密度值比正常对照组明显增加,且差异有统计学意义(a'=0.005,P0.005);三组干预组分别与NEC模型组比较,新生大鼠肠道活性caspase-3蛋白积分光密度值均明显降低,且差异均具有统计学意义(a'=0.005,P0.005)；三组干预组间两两比较,干预3组肠道活性caspase-3蛋白积分光密度值明显低于干预1组,且差异有统计学意义(a'=0.005,P0.005),但干预2组与干预1组、干预3组相比,差异均无统计学意义(a'=0.005,P0.005)。6.新生大鼠肠道Bcl-2表达与rhEPO剂量的关系新生大鼠肠道Bcl-2表达与rhEPO剂量之间存在正相关关系(rs=0.887,P=0.000)。7.新生大鼠肠道活性caspase-3蛋白与rhEPO剂量的关系肠道活性caspase-3蛋白积分光密度值与rhEPO剂量之间存在负相关关系(rs=-0.872,P=0.000)。8.肠道活性caspase-3蛋白积分光密度值与肠道组织病理损伤的关系肠道活性caspase-3蛋白积分光密度值与肠道组织病理损伤呈正相关关系(rs=0.768,P=0.000)。 结论：1.人工喂养+缺氧+冷刺激可诱导新生SD大鼠肠道组织产生接近人类新生儿坏死性小肠结肠炎样的病理改变。2.实验表明肠道细胞凋亡参与了NEC的发病过程,并且肠道细胞的凋亡程度与NEC的严重程度呈正相关关系。3.口服rhEPO能减轻实验组新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的临床症状,使肠道活性caspase-3蛋白减少,Bcl-2表达上调,抑制肠道细胞凋亡,减轻肠道病理损伤,降低NEC的发病率。4.本次实验中,rhEPO10U/ml的预防效果最佳。
【关键词】：重组人促红细胞生成素 坏死性小肠结肠炎 细胞凋亡 Bcl-2caspase-3
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 英文~.略语表4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 引言13-16
• 材料和方法16-22
• 结果22-36
• 讨论36-46
• 结论46-47
• 参考文献47-52
• 综述52-68
• 参考文献62-68
• 攻读学位期间文章发表情况68-69
• 致谢69

【参考文献】

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