凉血化瘀法对紫癜性肾炎大鼠血尿、蛋白尿和肾组织Nephrin及Podocin的影响

发布时间：2017-09-24 06:17

  本文关键词：凉血化瘀法对紫癜性肾炎大鼠血尿、蛋白尿和肾组织Nephrin及Podocin的影响

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【摘要】：过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)是儿童时期最常见的微血管炎,临床以皮肤紫斑、腹痛或伴便血、关节疼痛、肾脏炎症等为主要表现。HSP可引起多脏器损害,其中大约有20%-80%可涉及肾脏,造成紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis,HSPN)。大多数的HSPN预后尚可,但仍有部分患儿病程迁延,少数甚至发展成慢性肾功能不全,直至终末期肾病。通过对HSPN研究进展的分析,发现目前鲜有关于HSPN模型的报道,没有成熟的动物模型,限制了对HSP及HSPN病理机制、治疗方案的探索,同时为新药的研发带来困难。另一方面,凉血化瘀法是中医治疗HSPN血尿及蛋白尿的主要方法,近几年研究发现裂孔膜蛋白Nephrin及Podocin与肾脏疾病导致的蛋白尿关系密切,凉血化瘀法对Nephrin及Podocin的影响目前还未有相关研究。目的 探索并建立有效的HSPN大鼠模型,观察丹芍颗粒Ⅲ对HSPN大鼠血尿、蛋白尿和肾组织Nephrin及Podocin的影响,探讨凉血化瘀法对HSPN大鼠的治疗作用及其可能机制。方法 1.将21只SD大鼠(雄性)按随机数字表法分为空白组、模型组、丹芍组,每组7只。模型组和丹芍组以BSA+LPS+CCl4方法造就IgA肾病模型,同时用热性药物灌胃造就瘀热模型,复合成为HSPN动物模型。 2.丹芍组给予丹芍颗粒Ⅲ进行治疗。造模及治疗结束后应用尿沉渣计数法检测尿红细胞个数,BCA法检测24h尿蛋白定量；光镜下观察肾小球系膜变化；采用间接免疫荧光法检测肾小球Nephrin及Podocin的表达及分布；采用RT-PCR技术检测肾组织Nephrin mRNA和Podocin mRNA的表达。 3.采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。结果 1.模型组仅2例出现皮下紫癜,但模型组镜下红细胞计数及24h尿蛋白定量均显著高于空白组,差异有统计学意义(P0.01),病理结果提示造模后肾组织肾小球系膜明显增生,肾小管肿胀,肾小球上有IgA沉积,说明造模有效； 2.丹芍组大鼠的尿红细胞计数及尿蛋白定量均明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.01)； 3.丹芍组大鼠肾组织病理显示肾小球系膜增厚,但较模型组好转,仅有少量炎症细胞浸润； 4.免疫荧光结果显示丹芍组大鼠肾小球Nephrin表达量较模型组升高,差异有统计学意义(P0.01),丹芍组肾小球Podocin表达虽然较模型组有上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05)； 5.激光共聚焦显微镜下模型组的肾小球Nephrin及Podocin蛋白分布不均,甚至出现断裂,丹芍组大鼠肾小球Nephrin及Podocin蛋白分布较模型组有所改善； 6.RT-PCR结果表明丹芍组大鼠肾组织Nephrin mRNA及Podocin mRNA的表达较模型组升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 1.综合模拟IgA肾病与瘀热证实验动物模型,复合成为HSPN模型的造模方法可行,但需要进一步重复实验进行验证。 2.以凉血化瘀为主要作用机制的丹芍颗粒Ⅲ能有效降低HSPN大鼠血尿及蛋白尿水平,改善肾组织炎症反应,改善肾小球Nephrin及Podocin的分布不均及断裂的情况,并能提高肾组织Nephrin mRNA及Podocin mRNA的表达。
【关键词】：凉血化瘀 丹芍颗粒Ⅲ 紫癜性肾炎 动物模型 Nephrin Podocin
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R272
【目录】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-13
• 第一部分 理论研究13-27
• 1 HSPN的中医药研究概况13-17
• 1.1 病名溯源13
• 1.2 历代医家对病因病机的探讨13-15
• 1.3 历代医家对治则治法的阐述15-17
• 2 HSPN的现代医学研究概况17-23
• 2.1 流行病学17
• 2.2 发病原因及发病机制17-19
• 2.3 诊断19-20
• 2.4 西医治疗20-22
• 2.5 中西医结合治疗22
• 2.6 预后22-23
• 3 Podocin及Nephrin与HSPN的关系23-24
• 3.1 Podocin及Nephrin的作用23-24
• 3.2 Podocin Nephrin与继发性肾病的关系24
• 4 复合造模的依据24-26
• 4.1 建立IgA肾病模型的依据25
• 4.2 建立“瘀热证”模型的依据25-26
• 5 丹芍颗粒的前期研究成果26-27
• 第二部分 实验部分27-36
• 1 材料27-28
• 1.1 实验动物27
• 1.2 实验药物27
• 1.3 实验试剂27
• 1.4 实验仪器及设备27-28
• 2 方法28-32
• 2.1 HSPN实验动物模型的建立28
• 2.2 实验分组、给药方案及标本的采集28-29
• 2.3 免疫组化法检测实验大鼠肾小球IgA沉淀29
• 2.4 实验大鼠尿红细胞计数及尿蛋白定量检测29-30
• 2.5 实验大鼠肾组织病理切片30
• 2.6 间接免疫荧光法检测肾小球Podocin及Nephrin的表达30
• 2.7 RT-PCR法检测肾组织Podocin mRNA及Nephrin mRNA的表达30-32
• 2.8 数据统计32
• 3 结果32-36
• 3.1 空白组与模型组肾小球IgA沉积对比32-33
• 3.2 丹芍颗粒Ⅲ对实验大鼠血尿、蛋白尿水平的影响33
• 3.3 丹芍颗粒Ⅲ对实验大鼠肾小球Podocin及Nephrin表达及分布的影响33-34
• 3.4 丹芍颗粒Ⅲ对实验大鼠肾组织Podocin mRNA及Nephrin mRNA表达的调控作用34-35
• 3.5 大鼠病理切片结果35-36
• 第三部分 讨论36-38
• 第四部分 结语38-40
• 1 结论38
• 2 创新之处38
• 3 研究展望38-40
• 参考文献40-47
• 英文缩略词表47-49
• 硕士在读期间发表论文49-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘玉清;丁樱;翟文生;任献青;杨晓青;;小儿过敏性紫癜性肾炎肾脏病理分级与中医辨证的关系[J];安徽中医学院学报;2011年05期

2 孙轶秋,汪受传,金钟大,朱萱萱;丹芍颗粒改善微循环、抗炎、抗Ⅰ型变态反应的实验研究[J];北京中医;2003年01期

3 袁斌;孙轶秋;樊忠民;吴波;刘光陵;李辉;孔飞;袁增辉;张永春;;凉血化瘀通络法治疗小儿过敏性紫癜肾炎临床疗效及病理类型关系[J];中华中医药杂志;2011年03期

4 张晓强;刘品莉;李孟芳;任文栋;;过敏性紫癜动物模型的研制思路[J];中华中医药杂志;2011年10期

5 梁s，

本文编号：909821