脂联素对窒息新生鼠心肌损伤作用及其机制的研究

发布时间：2017-09-29 22:23

  本文关键词：脂联素对窒息新生鼠心肌损伤作用及其机制的研究

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【摘要】：目的： 1、建立新生鼠窒息模型，观察窒息后新生鼠血清心肌酶（CK、LDH）变化、心肌组织损伤及心肌细胞凋亡情况。 2、探讨窒息新生鼠缺氧缺血性心肌损伤过程存在AMPK信号通路的激活。 3、研究脂联素对窒息新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的作用与心肌组织AMPK表达的影响，并探讨其可能的机制。 方法： 1、实验分组：50只7日龄新生SD大鼠按完全随机法随机分成5组（每组10只）：假手术组、窒息组、APN组、Compound C组、APN+Compound C组。 2、新生鼠常压窒息模型制备及药物干预：仅假手术组模拟常压窒息过程，不塞瓶及复氧，其余四组制备常压窒息模型，，APN组及APN+Compound C组在窒息前半小时给予腹腔注射APN120μg/kg,Compound C组与APN+Compound C组在窒息前1小时给予腹腔注射Compound C20mg/kg,假手术组及窒息组分别接受同剂量的生理盐水。每组分别在复氧2小时后立即取血及心脏组织。 3、观察指标：检测血清心肌酶CK、LDH水平；HE染色观察心肌病理形态学改变；免疫组织化学染色法检测心肌组织AMPK蛋白表达含量；TUNEL法定性及定量分析心肌细胞凋亡。 4、数据分析：采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，实验数据以均数标准差（x s）表示，采用单因素方差分析（one-wayANOVA），并进行方差齐性检验，两两比较用SNK-q检验，P＜0.05表示有统计学意义，P＜0.01表示有显著性差异。 结果： 1、各组血清心肌酶CK、LDH值比较：与假手术组相比，窒息组CK、LDH值显著升高（P＜0.01）；与窒息组相比，APN组心肌酶CK、LDH水平明显下降（P＜0.01），而Compound C组及APN+Compound C组CK、LDH值明显升高（P＜0.01）；但APN+Compound C组CK、LDH水平低于Compound C组，且差异显著（P＜0.01）。 2、心肌组织病理形态学改变：假手术组大鼠心肌细胞排列规则整齐，组织间质无炎性水肿，未见炎性细胞浸润，细胞质均匀淡染，细胞核清晰可见；窒息组、Compound C组及APN+Compound C组均可见心肌细胞排列紊乱，间质明显充血水肿，大量炎性细胞浸润，细胞核不规则，呈浓缩状，部分细胞出现坏死，核消失，细胞呈空泡样。APN组上述改变较前三组明显减轻，心肌间质充血水肿及细胞坏死不明显，炎性细胞浸润少见。 3、心肌组织AMPK蛋白表达：与假手术组比较，窒息组AMPK蛋白表达升高，差异显著（P＜0.01）；与窒息组比较，APN组AMPK蛋白显著升高（P＜0.01），而Compound C组AMPK蛋白表达下降明显（P＜0.01）；与CompoundC组相比，APN+Compound C组AMPK蛋白表达升高，且差异明显（P＜0.01）。 4、心肌细胞凋亡荧光显色：在荧光显微镜下观察可见假手术组仅有少量的凋亡细胞荧光显色，窒息组、Compound C组及APN+Compound C组凋亡细胞明显增多，APN组凋亡细胞较前三组均减少，但多于假手术组。 5、心肌细胞凋亡指数（Apoptotic Index，AI）结果比较：与假手术组相比，窒息组AI水平显著升高（P＜0.01）；与窒息组相比，APN组AI水平明显下降（P＜0.01），而Compound C组AI水平明显升高（P＜0.01）；与Compound C组相比，APN+Compound C组AI水平明显降低（P＜0.01）。 结论： 1、脂联素对窒息新生鼠缺氧缺血性心肌损伤有保护作用，能够减少心肌细胞凋亡。 2、新生鼠窒息所致的缺氧缺血性心肌损伤过程存在AMPK信号分子的激活。 3、脂联素通过激活AMPK信号转导途径发挥对新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的保护作用。 4、AMPK抑制剂Compound C阻断了脂联素的心肌保护作用。
【关键词】：脂联素 窒息 心肌缺氧缺血性损伤 AMPK 心肌细胞凋亡
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词表10-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 材料与方法14-21
• 2.1 实验材料14-16
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 主要实验仪器14
• 2.1.3 主要实验试剂14-15
• 2.1.4 主要试剂配制15-16
• 2.2 实验方法及步骤16-20
• 2.2.1 实验动物分组与给药16
• 2.2.2 新生鼠常压窒息模型的制备16-17
• 2.2.3 血清心肌酶 CK、LDH 的检测17
• 2.2.4 HE 染色观察心肌组织病理形态学改变17
• 2.2.5 免疫组化法检测心肌组织 AMPK 蛋白表达17-18
• 2.2.6 TUNEL 法检测心肌细胞凋亡18-20
• 2.3 统计学方法20-21
• 第3章 结果21-27
• 3.1 新生鼠窒息缺氧后的表现21-22
• 3.2 各组新生鼠血清心肌酶 CK、LDH 浓度变化22-23
• 3.2.1 各组新生鼠血清心肌酶 CK 浓度变化：见表 1（图一）22-23
• 3.2.2 各组新生鼠血清心肌酶 LDH 浓度变化：见表 2（图二）23
• 3.3 各组新生鼠心肌组织病理形态学改变23-24
• 3.4 各组新生鼠心肌组织 AMPK 蛋白表达的变化24-25
• 3.5 各组新生鼠心肌细胞凋亡的变化25-27
• 3.5.1 各组心肌细胞凋亡定性分析25
• 3.5.2 各组心肌细胞凋亡指数（AI）结果分析25-27
• 第4章 讨论27-34
• 4.1 新生鼠窒息与缺氧缺血性心肌损伤27-28
• 4.2 心肌缺氧缺血性损伤与心肌细胞凋亡28-29
• 4.3 AMPK 对缺氧缺血性心肌损伤的影响29-30
• 4.4 实验药物干预的选取及结果分析30-32
• 4.5 APN-AMPK 与缺氧缺血性心肌损伤32-34
• 第5章 结论34-35
• 第6章 展望35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-40
• 附图40-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 综述45-51
• 参考文献49-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：944592