EPO促进胚胎期氟他胺诱导的隐睾生殖发育及Leydig细胞增殖分化的实验研究

发布时间：2017-10-04 14:16

  本文关键词：EPO促进胚胎期氟他胺诱导的隐睾生殖发育及Leydig细胞增殖分化的实验研究

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【摘要】：目的探讨促红细胞生成素(EPO)对胚胎期氟他胺(Flu)诱导隐睾生殖细胞发育的生物效应及其作用机制;探讨外源性EPO对睾丸原代Leydig细胞增殖分化及内分泌功能的影响。方法1氟他胺诱导后的SD仔鼠出生后随机分为三组:Flu组(n=36)、Flu+EPO组(n=42)和Flu+PBS组(n=32),正常饲养的SD仔鼠分为正常对照组(n=40)及EPO组(n=16);Flu组和正常对照组常规饲养,Flu+EPO组、EPO组及Flu+PBS组于PD1~7 d隔天腹腔注射1000 U/kg外源性EPO或同等体积的PBS。PD25时统计隐睾发生率及睾丸脏器系数,观察睾丸组织学变化,统计生殖指数,测量曲细精管横截面积和直径,免疫组织化学法及Western blot检测睾丸间隙连接蛋白Connexin43在睾丸组织中的表达。Western blot及免疫组化检测睾丸组织piwil2、piwil4蛋白质表达,Western blot检测睾丸组织内EPO、EPOR表达水平,ELISA检测睾丸组织内睾酮的含量。2差速贴壁法分离1W龄、3W龄及7W龄雄性SD大鼠睾丸leydig细胞进行原代培养,在培养基中加入2U/ml外源性EPO进行干预,MTT检测各组细胞增殖指数,3β-HSD染色检测leydig细胞分化能力,HPLC检测细胞培养液中睾酮含量。结果1Flu+EPO组隐睾发生率为38.1%(16/42),较Flu组55.6%(20/36)及Flu+PBS组53.1%(17/32)降低;Flu隐睾组睾酮含量明显低于正常对照组(P0.05),而Flu+EPO隐睾组的睾酮含量与正常对照组比较无统计学差异(P0.05);EPO组、Flu非隐睾组、Flu隐睾组、Flu+EPO非隐睾组及Flu+EPO隐睾组的睾丸组织EPO/EPOR比值均明显高于正常对照组(P0.05)。Flu+EPO隐睾组生精上皮细胞数量、睾丸脏器系数、生殖指数、平均曲细精管面积及直径均明显大于Flu组(P0.01,P0.05,P0.01,P0.01)且与正常对照组无明显差异。EPO能够促进Connexin43蛋白在隐睾组织中的正常表达。Flu隐睾组睾丸组织piwil2、piwil4蛋白分布异常,Flu+EPO隐睾组睾丸组织piwil2、piwil4蛋白表达与正常对照组比较无明显差异。2除了7W龄组培养72h时,其他所有观察点的EPO组原代培养睾丸leydig细胞的数量均要多于无EPO组(P0.05)。三个年龄组中,同一时间点无EPO组与EPO组间比较,3β-HSD染色细胞阳性率均无统计学差异(P0.05)。3W龄组及7W龄组,24h、48h、72h时EPO组培养液睾酮含量均明显高于无EPO组(P0.001)。结论1外源性EPO可以降低胚胎期Flu暴露后隐睾发生率,促进隐睾生殖细胞发育,维持隐睾睾丸组织Connexin43正常表达;EPO可通过改善隐睾睾丸内睾酮水平,促进血睾屏障正常形成,使piwil2、piwil4蛋白正常表达并提高隐睾模型的生殖潜能。2EPO可促进具有增殖潜能的leydig细胞增殖分裂,并促进ALCs分泌睾酮,但对Leydig细胞的分化作用并不显著。
【关键词】：氟他胺 隐睾 促红细胞生成素 leydig细胞 生殖细胞发育
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R726.9
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 参考文献15-16
• 第一部分 EPO促进胚胎期氟他胺诱导隐睾生殖发育的实验研究16-35
• 1 材料和方法16-21
• 2 结果21-29
• 3 讨论29-32
• 参考文献32-35
• 第二部分 外源性EPO对睾丸原代Leydig细胞增殖分化及内分泌功能的影响35-46
• 1 材料与方法35-39
• 2 结果39-42
• 3 讨论42-44
• 参考文献44-46
• 全文总结46-47
• 文献综述47-56
• 参考文献51-56
• 致谢56-57
• 攻读学位期间发表的论文57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Erythropoietin gene transfer into rat testes by in vivo electropo-ration may reduce the risk of germ cell loss caused by cryptorchidism[J];Asian Journal of Andrology;2005年04期

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本文编号：971105