WT1基因定量分析在儿童急性白血病MRD检测中的研究

发布时间：2017-10-05 02:09

  本文关键词：WT1基因定量分析在儿童急性白血病MRD检测中的研究

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【摘要】：目的： 采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法检测WT1基因在急性白血病患儿外周血和骨髓中的表达,探讨WT1基因在检测微小残留病(minimal residual disease,MRD)中的价值。 方法： 采用实时荧光定量PCR方法,检测23例初治急性白血病患儿、80例次完全缓解患儿外周血及骨髓中WT1基因的表达水平,以10例非肿瘤患儿为正常对照；流式细胞术检测MRD,并同时观察白血病患儿疾病状态。23例初治急性白血病患儿包括16例急性淋巴细胞白血病(ALL)及7例急性粒细胞白血病(AML),其中初治ALL组于治疗前、治疗第15天、33天及3个月,初治AML组于治疗前、治疗第15天、1个月、3个月分别采集外周血和骨髓标本,检测WT1表达。80例次完全缓解组患儿(ALL56例次,AML24例次)于治疗第3个月、6个月及12个月分别采集外周血和骨髓检测WT1表达阳性率。 结果： 1、正常对照组儿童外周血及骨髓WT1表达阳性率均为0,初治白血病组患儿外周血及骨髓WT1表达阳性率均为65.2%,初治白血病组外周血及骨髓WT1的表达均明显高于正常对照组(p=0.001)。ALL和AML外周血WT1表达阳性率比较,骨髓WT1表达阳性率比较,差异均无统计学意义(p=0.533)。完全缓解患儿治疗第3个月、6个月外周血及骨髓WT1表达阳性率明显高于第12个月(p均0.05)。2、初治ALL患儿治疗前、治疗第15天、33天及3个月外周血WT1表达量分别为0.53±0.14、0.24±0.13、0.18±0.05、0.15±0.11,各组间差异具有统计学意义(F=24.68,p0.001)；治疗第15天、33天及3个月WT1表达量明显低于治疗前(p均0.05),第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义(p0.05)。初治ALL患儿治疗前、15天、33天及3个月骨髓WT1表达量分别为0.72±0.14、0.16±0.06、0.12±0.02、0.12±0.05,各组间差异具有统计学意义(F=135.27,p0.001),治疗第15天、33天及3个月WT1表达量明显低于治疗前(p均0.05)。治疗第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义(p0.05)所有初治ALL患儿皆于33天达完全缓解。3、初治AML患儿治疗前、15天、1个月及3个月外周血WT1表达量分别为0.70±0.07、0.20±0.06、0.18±0.05、0.15±0.06,各组间差异具有统计学意义(F=139.29,p0.001),治疗第15天、33天及3个月WT1表达量明显低于治疗前(p均0.05)治疗第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义(p0.05)。初治AML患儿治疗前、治疗第15天、1个月及3个月患儿骨髓WT1表达量分别为0.87±0.04、0.24±0.05、0.21±0.05、0.18±0.10,各组间差异具有统计学意义(F=241.29,p0.001),治疗第15天、33天及3个月WT1表达量明显低于治疗前(p均0.05)。治疗第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义(p0.05)。全部初治AML患儿皆于1～2个月内获得完全缓解。4、初治ALL患儿外周血WTl表达量与MRD成正相关,(r=0.999,p0.001)；初治ALL患儿骨髓WT1表达量与MRD成正相关(r=0.997,p0.001)。5、3例复发白血病患儿复发前3个月WT1水平上升。 结论： 1、实时荧光定量PCR方法检测白血病患儿WTl表达简便易行、准确性高、特异性好。2.WT1基因在非肿瘤儿童外周血及骨髓均不表达,而在急性白血病治疗前高表达。3.初治急性白血病患儿诱导缓解化疗后WT1表达水平明显低于初治时。4.WT1阳性率随着治疗时间的延长明显下降。5.ALL患儿外周血及骨髓中WT1表达量与流式细胞仪检测的MRD呈正相关。对急性白血病患儿外周血及骨髓中WT1基因表达进行定量分析,可用于MRD的监测。
【关键词】：WT1 急性白血病 微小残留病 实时荧光定量PCR
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要2-5
• Abstract5-12
• 引言12-13
• 第1章 材料与方法13-20
• 1.1 材料13-15
• 1.1.1 研究对象13
• 1.1.2 实验试剂13-14
• 1.1.3 实验仪器14-15
• 1.2 WT1定量分析方法15-18
• 1.2.1 标本采集与保存15
• 1.2.2 总RNA的提取15-16
• 1.2.3 RNA浓度检测及鉴定16
• 1.2.4 cDNA的合成16-17
• 1.2.5 PCR反应17-18
• 1.3 流式细胞仪MRD检测18
• 1.4 数据处理18-19
• 1.5 统计学处理19-20
• 第2章 结果20-32
• 2.1 荧光定量PCR方法的准确性和特异性检测20-22
• 2.1.1 引物特异性检测20-21
• 2.1.2 扩增曲线21
• 2.1.3 溶解曲线21-22
• 2.2 急性白血病与正常对照组WT1表达阳性率比较22
• 2.2.1 急性白血病与正常对照组外周血WT1表达阳性率比较22
• 2.2.2 急性白血病与正常对照组骨髓WT1表达阳性率比较22
• 2.3 初治ALL与AML患儿WT1表达阳性率比较22-23
• 2.4 完全缓解组WT1表达阳性率比较23-25
• 2.4.1 ALL完全缓解患儿治疗不同时间外周血WT1表达阳性率比较23
• 2.4.2 AML完全缓解患儿治疗不同时间外周血WT1表达阳性率比较23-24
• 2.4.3 ALL完全缓解患儿治疗不同时间骨髓WT1表达阳性率比较24
• 2.4.4 AML完全缓解患儿治疗不同时间骨髓WT1表达阳性率比较24-25
• 2.5 初治急性白血病患儿不同时期WT1表达水平比较25-29
• 2.5.1 ALL患儿不同时间外周血WT1表达水平比较25-26
• 2.5.2 ALL患儿不同时间骨髓WT1表达水平比较26-27
• 2.5.3 AML患儿不同时间外周血WT1表达水平比较27-28
• 2.5.4 AML患儿不同时间骨髓WT1表达水平比较28-29
• 2.6 初治组WT1定量水平与流式细胞术检测MRD相关性29-30
• 2.6.1 初治ALL外周血WT1定量水平与流式细胞术检测MRD关系29
• 2.6.2 初治ALL骨髓WT1定量水平与流式细胞术检测MRD关系29-30
• 2.7 急性白血病治疗疗效观察和复发患儿WT1表达30-32
• 第3章 讨论32-34
• 结论34-35
• 参考文献35-37
• 综述37-53
• 综述参考文献47-53
• 攻读学位期间的研究成果53-54
• 致谢54-55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 成枫;冯献启;赵洪国;杨颉;杨X;;WT1基因及蛋白在急性髓性白血病的表达及临床意义[J];山东医药;2010年13期

2 张科花;李广伦;刘竹珍;杨颉;高顺姬;;急性髓细胞白血病病人骨髓geminin和cdt1基因表达及意义[J];齐鲁医学杂志;2011年04期

3 韩洁;朱晓华;高怡瑾;杨毅;吴s，

本文编号：974152