GDNF及其受体RET在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端的表达及意义

发布时间：2017-10-09 08:18

  本文关键词：GDNF及其受体RET在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端的表达及意义

  更多相关文章： GDNF RET 肛门直肠畸形 肠神经系统

【摘要】：目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及其受体RET在先天性肛门直肠畸形（ARM）胎鼠胚胎发育过程中直肠末端的表达和分布情况，探讨其对ARM胚胎期肠神经系统发育的影响，为ARM患儿术后排便功能障碍的治疗提供理论依据。方法：选用健康未经产成年SD孕鼠40只，生理盐水对照组10只和乙烯硫脲组30只，在孕10天时乙烯硫脲组给予10g/L乙烯硫脲（ETU）（125mg/kg）灌胃制作ARM动物模型，对照组则在孕10d灌胃注入等量生理盐水。两组孕鼠分别在孕16、18、20天剖腹取出宫内所有胎鼠，肉眼及显微镜下观察两组肛门发育情况，并分三组，生理盐水对照组、乙烯硫脲对照组（未产生ARM胎鼠）、乙烯硫脲畸形组（产生ARM胎鼠）。取胎鼠直肠末端行苏木素/伊红（HE）染色，计算三组胎鼠在16、18、20天直肠末端肌间和黏膜下神经丛数量；通过免疫组织化学（IHC）、蛋白印迹（westernblot）法检测三组胎鼠在不同时间点直肠末端GDNF及RET蛋白定位及定量表达情况，，实时荧光定量聚合酶连反应（qRT-PCR）法检测三组胎鼠直肠末端GDNF mRNA的表达情况。 结果： ①肉眼及解剖显微镜大体观：对照组孕鼠共产胎鼠126只，存活率100%，无肛门直肠畸形发生，无死胎、发育不良胎、宫内吸收胎等任何畸形，乙烯硫脲孕鼠组共产胎鼠208只，发生ARM胎鼠123只，发生率59.135%，除无肛畸形外，还合并无尾、短尾、四肢畸形、脊柱裂、脑脊膜或骶脊膜膨出、腹裂、脐膨出等畸形。 ②三组胎鼠肛门组织形态学改变及直肠末端神经丛数量比较：生理盐水对照组胎鼠及ETU对照组胎鼠肛门开口位置正常，而ETU畸形组胎鼠肛门开口处为一闭合盲端，无正常肛门解剖结构，直肠末端闭锁处为增生鳞状上皮组织及增厚的肌层。生理盐水对照组和ETU对照组胎鼠在16、18、20天直肠末端神经丛数量，两组比较差异无统计学意义（P0.05），三组胎鼠在第16天比较差异无统计学意义（P0.05），在18天时，生理盐水对照组、ETU对照组与ETU畸形组比较差异有统计学意义（11.400±3.134比7.800±1.989，P0.05；11.200±3.425比7.800±1.989，P0.05），在第20天时三组比较差异更为显著（66.100±4.954比25.200±3.048，P0.01；67.600±5.481比25.200±3.048，P0.01），生理盐水对照组、ETU对照组16天、18天与20天比较有显著性差异（P0.01），18天的ETU畸形组与16天比较差异有统计学意义（P0.05），而与20天比较有显著性差异（P0.01）。 ③GDNF、RET蛋白分布及表达情况：GDNF、RET主要表达在胎鼠直肠末端肌间神经丛及黏膜下神经丛的胞膜及胞质中，在第16天三组比较差异无统计学意义（P0.05），在18和20天生理盐水对照组、ETU对照组组间比较差异无统计学意义（P0.05），GDNF、RET在18天生理盐水对照组、ETU对照组与ETU畸形组比较有统计学意义（41.625±3.888比23.281±3.993， P0.01；41.349±1.799比23.281±3.993，P0.01；42.000±12.275比27.643±6.540，P0.05；41.965±10.374比27.643±6.540，P0.05），GDNF、RET在20天生理盐水对照组、ETU对照组与ETU畸形组比较有显著性差异（165.209±12.35比48.738±8.262， P0.01；162.153±13.020比48.738±8.262，P0.01；122.107±17.250比40.807±9.933，P0.01；125.529±18.754比40.807±9.933，P0.01），GDNF、RET在生理盐水对照组和ETU对照组18天与16天比较差异有统计学意义（P0.05），而和20天比较有显著性差异（P0.01），GDNF、RET在ETU畸形组18天与16、20天比较差异无统计学意义（P0.05），而16天和20天比较有显著性差异（P0.01）。 ④GDNF、RET蛋白定量情况：在16天三组比较差异无统计学意义（P0.05），在18、20天生理盐水对照组和ETU对照组组间比较差异无统计学意义（P0.05），GDNF、RET在18天生理盐水对照组、ETU对照组与ETU畸形组比较差异有统计学意义（0.706±0.076比0.478±0.027，P0.01；0.686±0.068比0.478±0.027，P0.01；0.292±0.063比0.105±0.047，P0.05；0.293±0.093比0.105±0.047，P0.05），GDNF、RET在20天生理盐水对照组、ETU对照组与ETU畸形组比较有显著性差异（1.655±0.063比0.501±0.030，P0.01；1.589±0.072比0.501±0.030，P0.01；1.333±0.134比0.208±0.148，P0.01；1.395±0.194比0.208±0.148，P0.01），GDNF、RET在生理盐水对照组和ETU对照组18天与16天比较差异有统计学意义（P0.05），而和20天比较有显著性差异（P0.01），而ETU畸形组GDNF、RET差异无统计学意义（P0.05）。 ⑤GDNF mRNA表达情况：在16天三组比较差异无统计学意义（P0.05），在18、20天生理盐水对照组和ETU对照组组间比较差异无统计学意义（P0.05），GDNFmRNA在18天生理盐水对照组、ETU对照组与ETU畸形组比较差异有统计学意义（103.624±27.533比79.169±11.697，P0.05；105.184±19.634比79.169±11.697，P0.05），GDNF mRNA在20天生理盐水对照组、ETU对照组与ETU畸形组比较有显著性差异（151.496±33.622比94.873±11.309， P0.01；150.738±21.423比94.873±11.309，P0.01），在生理盐水对照组和ETU对照组18天与16天比较差异有统计学意义（P0.05），而与20天比较有显著性差异（P0.01），GDNF mRNA在ETU畸形组18天与16、20天比较无统计学意义（P0.05），而16天和20天比较有显著性差异（P0.01）。 结论： ①GDNF及受体RET在正常胚胎直肠肠壁肌间及粘膜下的分布及表达是随着胚胎的不断发育逐渐增强；而在ARM胎鼠的直肠肠壁肌间及粘膜下的分布及表达是明显减弱，并随着胚胎的不断发育与正常胎鼠差异更加明显； ②GDNF/GFRa1/RET信号通路可能对调节ARM胎鼠肠神经系统发育有重要作用，GDNF及受体RET表达的减少可能影响ARM患儿术后排便功能； ③ETU对未致畸胎鼠的肠神经系统发育无明显影响； ④胎鼠的第18-20天可能是胎鼠肠神经系统发育的关键时间。
【关键词】：GDNF RET 肛门直肠畸形 肠神经系统
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R726.5
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 1 材料与方法14-25
• 2 结果25-35
• 3 讨论35-39
• 4 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-50
• 参考文献47-50
• 致谢50-52
• 作者简介52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 何秋明;肖尚杰;夏慧敏;;大鼠阴道涂片的观察[J];广州医学院学报;2007年04期

2 宓开鸿,李继承;人胚胎结肠肠神经系统发育的观察[J];解剖学报;2000年03期

3 刘丽;肠神经系统遗传缺陷与先天性巨结肠[J];临床儿科杂志;2004年02期

4 汪健;;先天性肛门直肠畸形治疗近况[J];临床外科杂志;2007年05期

5 王维林;;先天性肛门直肠畸形术后患儿远期生活质量问题[J];临床外科杂志;2008年05期

6 王小林;魏明发;;先天性肛门直肠畸形致病基因研究进展[J];临床外科杂志;2008年05期

7 牛会忠;王丽亚;耿建磊;;先天性巨结肠与RET基因突变相关性研究[J];河北医药;2013年01期

8 金曼;范一宏;张高松;李延玲;吕宾;张璐;;慢传输型便秘大鼠结肠组织GFRα1、RET、NCAM的表达以及外源性GDNF的影响[J];胃肠病学;2011年11期

9 白玉作,王维林,王伟,袁正伟;大鼠肛门直肠畸形的胚胎发育研究[J];中华小儿外科杂志;2003年02期

10 王练英,张志波,刘颖,李正;泄殖腔畸形动物模型制作及其病理特征[J];中华小儿外科杂志;1999年01期

本文编号：999111