重组胸腺素β4对放射性间质性肺炎的治疗作用及其机制研究

发布时间：2017-03-20 05:04

  本文关键词：重组胸腺素β4对放射性间质性肺炎的治疗作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的意义：放射性肺损伤是胸部肿瘤的放疗、骨髓移植的预处理等常见而难治的并发症之一,也见于战时核辐射和平时核事故。放射性肺损伤早期的病理变化主要表现为间质性肺炎(RIP),后期则以肺纤维化形成为主,严重降低患者的生存质量,限制了临床胸部肿瘤的放疗,也是核事故救治的瓶颈问题之一。目前尚无有效的治疗药物,临床常用的治疗方法包括应用肾上腺皮质激素、抗生素及吸氧祛痰等对症处理,皮质激素主要发挥的是抗炎效应,但其临床有效率仅为治愈率仅5.88%,总有效率仅有64.71%,且有明显的副作用,限制了其临床应用。重组胸腺素β4是重组蛋白类药物,属胸腺素β4的衍生物,该化合物具有自主知识产权。既往研究表明重组胸腺素β4具有减轻炎症反应、抗细胞凋亡以及减少胶原合成等作用,尚未见其用于放射性间质性肺炎或其它原因所致间质性肺炎的研究报道。因此,研究重组胸腺素β4对于放射性间质性肺炎的治疗作用,对于改善放射性肺损伤患者的生存质量,提高临床胸部肿瘤的放疗效果及核事故救治水平,具有重要的理论和实际意义。材料和方法：1.150只C57BL/6J小鼠随机分成6组(对照组、模型组、重组胸腺素β4低、中、高剂量组和地塞米松组),每组25只。采用20Gy X射线全胸照射建立RIP模型,重组胸腺素β4低、中和高剂量组的给药剂量分别为1、5、25μg/kg,地塞米松给药剂量为4.5mg/kg/次,2w后减半,均为腹腔注射给药,1次/日,连续给药30 d。通过小鼠死亡率、呼吸功能检测、肺组织病理观察、肺泡腔面积定量分析、肺组织炎性因子免疫组化法检测等方法,研究重组胸腺素β4对小鼠RIP的治疗作用,并初步探讨其机制。2.体外培养RAW264.7细胞,使用IFN-γ和LPS诱导分化为M1亚型,以IL-4诱导分化为M2亚型。诱导分化后加入不同浓度的重组胸腺素β4(1、10、100、1000μg/ml),于给药后24h、48h及72h应用MTT、ELISA等方法检测细胞增殖活力、巨噬细胞分泌因子的表达。实验结果：1.重组胸腺素β4对RIP小鼠死亡率的影响：RIP模型小鼠死亡率为12.0%,地塞米松组和高剂量组重组胸腺素β4组小鼠死亡率与模型组无显著差异；低剂量重组胸腺素p4组(8.0%)和中剂量重组胸腺素p4组小鼠死亡率(4.0%)显著低于模型组。2.重组胸腺素p4对RIP小鼠肺功能的影响：RIP小鼠肺功能多项指标异常,包括潮气量、每分钟通气量、吸气峰值、50%呼气流量、呼气峰值均显著降低；重组胸腺素p4的应用可改善小鼠肺功能,显著增加潮气量、每分钟通气量、吸气峰值、50%呼气流量、吸气峰值、呼气峰值,且效果优于地塞米松；三个剂量中以低和中剂量效果更佳。3.重组胸腺素p4对RIP小鼠肺组织病理变化的影响：重组胸腺素β4的应用可显著减少肺组织炎细胞浸润,明显减轻肺泡壁增厚,显著增加肺泡腔面积。三个剂量均有效,且效果优于地塞米松,三个剂量中以低和中剂量效果更佳。4.重组胸腺素β4对RIP小鼠肺组织中各炎性因子表达的影响：(1)IL-6：对照组小鼠肺组织可见少量IL-6阳性巨噬细胞,模型组阳性巨噬细胞明显增多,地塞米松组、低剂量和高剂量组的IL-6阳性巨噬细胞均可少于模型组。(2)IL-13：对照组小鼠肺组织可见少量IL-13阳性巨噬细胞,模型组、各给药组以及地塞米松组小鼠肺组织IL-13阳性巨噬细胞明显增多,各组之间未见显著差异。(3)TNF-α:对照组小鼠肺组织可见少量TNF-α阳性巨噬细胞,模型组、地塞米松组、高剂量组的TNF-α阳性巨噬细胞较对照组明显增多,低和中剂量组的TNF-α阳性巨噬细胞均可见少于模型组。(4)TGFβ:对照组小鼠肺组织可见少量TGFβ阳性巨噬细胞,模型组的TGFβ阳性巨噬细胞较对照组明显增多,低、中和高剂量组的TGFβ阳性巨噬细胞均可见少于模型组。5.重组胸腺素p4对M1和M2型巨噬细胞增殖活力的影响：重组胸腺素β4处理后24和72h,1、10和100μg/ml组M1型巨噬细胞增殖活力较对照组显著增强。重组胸腺素β4处理24h、48h,各剂量的重组胸腺素β4均能够促进M2型巨噬细胞的增殖。重组胸腺素β4处理后24h、48h,M2型巨噬细胞增殖活力均较M1型巨噬细胞为强。6.重组胸腺素β4对M1和M2型巨噬细胞细胞因子分泌的影响：(1)TNF-α:各剂量组巨噬细胞分泌的TNF-α含量较对照组有所增高,以10μg/ml组最为显著。(2)IL-13：各剂量组巨噬细胞分泌的的IL-13浓度较对照组均有所增高,但无统计学差异。(3)CTGF:Ml型巨噬细胞10组较对照组巨噬细胞分泌的CTGF显著降低,其余各组均与对照组无显著差异。M2型巨噬细胞除1μg/ml组较对照组巨噬细胞分泌的CTGF有所降低外,100、100μg/ml组较对照组巨噬细胞分泌的CTGF显著增高。(4)TGFβ:1μg/ml组M1型巨噬细胞较对照组巨噬细胞分泌的TGFP有所增高外,其余各组均有所降低。除10μg/ml组M2型巨噬细胞较对照组巨噬细胞分泌的TGFP降低外,其余各组组均增高。结论：1.重组胸腺素β4可减轻小鼠放射性间质性肺炎,表现为降低死亡率,改善肺功能,减轻肺组织间质性炎性病变,增加肺泡腔面积；且效果优于地塞米松。综合各项指标,以1和5μg/kg的应用剂量效果为佳。重组胸腺素β4减轻TH1和TH2型免疫反应是其有效治疗放射性间质性肺炎的机制之一。2.重组胸腺素β4促进M1、M2型巨噬细胞的增殖,调节M1、M2型巨噬细胞TNF-α、IL-13、TGFβ和CTGF等细胞因子的分泌,为其治疗放射性间质性肺炎机制之一,以低浓度作用效果更为理想。
【关键词】：重组胸腺素β4 放射 间质性肺炎 巨噬细胞
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 缩略词表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 引言13-16
• 主要仪器设备16-17
• 第一部分 重组胸腺素β4对放射性间质性肺炎的治疗作用研究17-46
• 材料和方法17-22
• 一、实验动物与分组17
• 二、照射方法17-18
• 三、给药方法18
• 四、小鼠死亡率统计及一般情况观察18
• 五、肺功能分析18-19
• 六、动物活杀取材与病理学检查19-20
• 七、肺泡腔面积的测算20
• 八、免疫组织化学染色法检测肺组织中IL-6、IL-13和TNFα、TGFβ的表达20-21
• 九、统计学处理21-22
• 结果22-38
• 一、重组胸腺素β4对RIP小鼠死亡率及一般情况的影响22-23
• 二、重组胸腺素β4对RIP小鼠呼吸功能的影响23-28
• 三、重组胸腺素β4对RIP小鼠肺组织结构的影响28-30
• 四、重组胸腺素β4对RIP小鼠肺泡腔面积的影响30-31
• 五、重组胸腺素β4对RIP小鼠肺组织中IL-6、IL-13和TNFα、TGFβ的表达影响31-38
• 讨论38-45
• 一、放射性间质性肺炎模型的建立38-39
• 二、放射性间质性肺炎的治疗研究现状39-40
• 三、重组胸腺素β4的研究现状40
• 四、重组胸腺素β4对放射性间质性肺炎的治疗作用研究40-42
• 五、重组胸腺素β4对TH1/TH2免疫反应的调节在其治疗RIP中的意义42-45
• 结论45-46
• 第二部分 重组胸腺素β4对小鼠RAW264.7生物学行为影响的研究46-58
• 材料和方法46-50
• 一、小鼠RAW264.7的传代培养和诱导分型及给药46-47
• 二、MTT比色法检测细胞增殖活力47-48
• 三、ELISA试剂盒法检测RAW264.7中细胞因子的表达48
• 四、统计学处理48-50
• 结果50-53
• 一、重组胸腺素β4对RAW264.7增殖活力的影响50-51
• 二、重组胸腺素β4对RAW264.7细胞因子分泌的影响51-53
• 讨论53-57
• 一、重组胸腺素β4对RAW264.7增殖活力的影响及意义54-55
• 二、重组胸腺素β4对RAW264.7分泌细胞因子的影响及意义55-57
• 结论57-58
• 参考文献58-64
• 附录64-65
• 致谢65-66
• 综述66-75
• 参考文献72-75

【参考文献】

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1 曹珍山，叶常青，袁丽珍，，涂开成，樊飞跃，马柳芳，杨瑞彪，张仁元;大鼠胸部受到20Gyγ线照射后肺组织的形态计量学改变[J];中华放射医学与防护杂志;1996年03期

  本文关键词：重组胸腺素β4对放射性间质性肺炎的治疗作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：257185