～（125）I-3，3’-二碘甲腺氨酸标记物的制备、鉴定和酸化及酸化产物纯化最佳条件的探索

发布时间：2020-04-05 19:46

【摘要】：目的:甲状腺是人体重要的内分泌腺体,甲状腺激素对调节身体代谢的整个过程十分重要,尤其在中枢神经系统成熟期间甲状腺激素在调节神经生长和突触形成上起着关键作用。人类胚胎或新生儿如若缺乏会导致先天性甲减,致使患儿出现神经精神损伤及发育障碍,因此应对先天性甲减进行筛查,以便早期诊断和治疗。研究发现来自胎儿流往母亲血清和尿中的3,3′-T_2S与一种相关的W物质(3,3′-T_2S的类似物,其化学和免疫学性质类似于3,3′-T_2S,对其抗体有明显的交叉反应,但不是一种物质)可反应胎儿甲状腺功能。因此我们首先制备3,3′-T_2的~(125)Ⅰ标记物并摸索酸化3,3′-T_2的最佳纯化条件,为进一步放免方法的建立及临床应用打下良好的基础。 方法:本研究采用氯胺T法以~(125)碘化钠标记3,3′-T_2;然后将标记反应产物进行柱层析(Sephadex LH-20,柱床1.5ml),以0.4mol/L pH6.2的磷酸缓冲液1ml、蒸馏水4ml、洗脱液Ⅰ(2mol/L氨水:甲醇=1:99,vol/vol)5ml洗脱收集所需产物;将收集产物于3cm×40cm Whatman Ⅰ滤纸条上点样并在37℃恒温、密闭15小时条件下进行下行纸层析分离;以3,3′-T_2纯品作为标准,通过下行纸层析、放射自显影、茚三酮显色等方法对标记产物进行鉴定,以确认是否是~(125)Ⅰ标记的3,3′-T_2;在通风橱中冰浴条件下将氯磺酸与二甲基甲酰胺按体积1:4缓慢混合后,取200μl加入氮气吹干的~(125)Ⅰ-3,3′-T_2试管内,室温避光过夜进行磺酸化后加入800μl冰水混匀;将磺酸化产物进行柱层析(Sephadex LH-20,柱床分别为1.5ml、5ml、30ml、60m1),先以0.1mol/L盐酸平衡柱子,上样后相继以0.1 mol/L盐酸、蒸馏水、洗脱液Ⅱ(1mol/L氨水:乙醇=1:99,vol/vol)进行洗脱,收集各管并进行放射性计数、作图。结果:3,3′-T_2的~(125)Ⅰ标记率为26.57%,放化纯度为95.24%,比放射性为116μCi/μg,经Sephadex LH-20柱分离出现2个峰;标记产物下行纸层析分离后经放射自显影鉴定可见~(125)Ⅰ-rT_3、~(125)Ⅰ-3,3′-T_2、游离~(125)Ⅰ,计算其Rf值分别为0.33、0.46、0.74;经下行纸层析、放射自显影、茚三酮显色的联合应用及标准品的对照证明Rf值0.46位置的物质就是~(125)Ⅰ-3,3′-T_2;酸化产物进行柱层
【图文】：

3’一TZ图83，3’一T:纸层析后茹三酮显色结果、‘2，，I一3，3，一T:的酸化产物(’251一3，3’一TZS)纯化最佳条件结果‘251一3，3’一T:磺酸化产物经不同长度sPehdaxeLH一20层析柱纯化，伴洗脱液分别洗脱出游离’251、’25工一3，3’一TZs、3，3’一TZ，它们分别对应图9、、图11、图12的三个峰，四种方案回收率均在90%以上。八曰n甘八

本文编号：2615452