CRIF1在骨髓间充质干细胞辐射氧化应激中的作用及其机制初步研究

发布时间：2017-03-25 02:11

  本文关键词：CRIF1在骨髓间充质干细胞辐射氧化应激中的作用及其机制初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景： 随着核能与核技术的广泛应用，人类遭受辐射的机会也越来越多，其中包括核事故和辐射源事故的潜在威胁、放疗患者和相关行业从业人员的正常细胞被动遭受杀伤等。辐射主要造成人体的血液、胃肠消化、神经和皮肤等一个或多个系统损伤，与辐射剂量、时间密切相关。辐射损伤救治的研究一直受到广大学者关注，尤其是急性重型辐射损伤因发生早、进展快、损伤重、严重骨髓免疫功能受损、并发症等原因，救治成功率低，缺乏有效的治疗方法。 骨髓间充质干细胞是一种参与构成骨髓造血微环境的多能干细胞，对辐射的耐受性比造血干细胞强，是辐射损伤后的造血恢复和重建的重要结构和功能组成。但骨髓间充质干细胞辐射耐受的机制尚不清楚。因此我们深入研究其辐射耐受机制，对于辐射防护和辐射损伤尤其重度急性放射病的救治具有十分重要的意义。 目的： 证实CRIF1参与BMSCs辐射损伤的早期氧化应激反应，初步探讨其分子机制。 方法：改良BMSCs体外培养体系，，分离扩增鉴定BMSCs，建立体外辐照BMSCs细胞模型，实时定量PCR检测辐射后12小时内CRIF1、NRF2的mRNA水平，WB技术检测CRIF1蛋白水平，流式细胞术检测BMSCs细胞周期分布，并构建CRIF1的过表达和抑制表达载体。 结果： 1、采用含10%胎牛血清的α-MEM的改良培养体系，从人骨髓中分离、培养具有塑料底物粘附性的细胞，目的细胞的CD45阳性率为5.57%，CD90为99.9%，CD14为1.62%，CD73为95.55%，CD34为0.46%，CD105为57.13%。体外成功诱导脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞分化；与传统培养体系比较，改良培养体系BMSCs的集落形成能力(集落个数11.3±1.53VS8.0±1.0，p0.05；单个集落平均细胞数目66.5±14.4VS59.2±8.2，p0.05)和细胞增殖能力明显增强(对数生长期4天VS10天；平台期15天VS19天)。 2、辐照后早期12小时，BMSCs的G1期比例在低剂量时(5Gy)，随时间延长增加，高剂量(20Gy)时随时间延长降低；G2期比例随时间延长、剂量增加而逐渐升高；S期比例随时间延长、剂量增加而逐渐降低。 3、BMSCs辐照后的早期12小时，CRIF1的mRNA表达量先下降，后上升至正常水平，其蛋白表达也呈相同趋势。 NRF2的mRNA表达趋势与CRIF1完全相反，表现为先上升，后下降至正常水平。 4、成功构建了CRIF1过表达载体pLentis-CMV-CRIF1-SFFV-GTP和CRIF1抑制表达载体pGreenPuro-CRIF1，其滴度均为1×10~8TU/ml。 结论： 1、成功建立改良的BMSCs体外分离培养体系，并且该方法培养的BMSCs体外扩增速度、增殖能力、克隆形成能力均明显改善。 2、在低剂量辐照损伤时, BMSCs出现G1期阻滞现象，可能与损伤修复有关；CRIF1可能通过与NRF2相互作用启动其下游Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶基因表达调控氧化应激反应。 3、成功构建了CRIF1过表达载体和抑制表达载体。
【关键词】：CRIF1 骨髓间充质干细胞 辐射损伤 氧化应激
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R818.74
【目录】：

• 缩略语表4-7
• Abstract7-10
• 摘要10-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 改良培养体系下间充质干细胞的分离培养、扩增、鉴定及状态比较14-28
• 2.1 材料与方法14-18
• 2.2 结果18-25
• 2.3 讨论25-27
• 2.4 结论27-28
• 第三章 CRIF1 在骨髓间充质干细胞辐射氧化应激中的作用及机制初步研究28-41
• 3.1 材料与方法29-34
• 3.2 结果34-37
• 3.3 讨论37-40
• 3.4 结论40-41
• 第四章 CRIF1 慢病毒过表达载体和 siRNA 抑制表达载体的构建41-60
• 4.1 材料与方法41-45
• 4.2 结果45-57
• 4.3 讨论57-59
• 4.4 结论59-60
• 全文总结60-61
• 参考文献61-67
• 文献综述67-78
• 参考文献72-78
• 攻读硕士学位期间发表的论文78-79
• 致谢79

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 韩磊;单信芝;刘芝军;王娟娟;;腹部辐射诱发大鼠肠黏膜损伤模型的建立[J];青岛大学医学院学报;2011年04期

2 冉茜;李忠俊;;CRIF1基因启动子克隆及活性分析[J];中国输血杂志;2010年01期

3 冉茜;李忠俊;张曦;梁雪;陈幸华;;CRIF1介导白血病骨髓基质细胞诱导Jurkat细胞周期阻滞的探讨[J];中国输血杂志;2010年12期

4 杨岩;陈晓;李薇;王冠军;;低剂量辐射对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响[J];吉林大学学报(医学版);2008年01期

5 雷晓宇;周新伏;;骨髓间充质干细胞的生物学特性以及在血液系统疾病中的应用[J];临床医学;2011年01期

6 郭月凤;张慧芳;杨彪;田还成;;急性辐射损伤的生物剂量估算方法[J];辐射研究与辐射工艺学报;2012年03期

7 黄粤;戴丽冰;钟晓e

本文编号：266518