CFL1与胶质瘤U251细胞放射抵抗关系的研究

发布时间：2020-05-27 05:59

【摘要】：背景与目的:由于胶质瘤呈浸润性生长,术后放射治疗已成为胶质瘤治疗的重要辅助手段之一。但因胶质瘤的放射抵抗性,其放疗效果不甚理想。CFL1在肿瘤的迁移和侵袭中有重要作用。本课题旨在探讨CFL1与胶质瘤U251细胞放射抵抗之间的关系及CFL1介导的U251细胞放射抵抗可能的机制,为提高胶质瘤对放射治疗的敏感性提供新的解决途径。方法:建立RR-U251细胞、质粒诱导过表达CFL1的U251细胞和RR-U251细胞、CFL1-siRNA敲除CFL1的U251细胞和RR-U251细胞。对不同方法处理的U251细胞和RR-U251细胞进行放射治疗,采用MTT法测定细胞的相对存活率,划痕实验测定细胞的迁移能力,Transwell小室法测定细胞的侵袭能力,流式细胞术测定细胞周期。Western Blot及荧光定量PCR实验观察CFL1表达,进而观察细胞的放射敏感性变化。建立裸鼠人胶质瘤移植模型,通过运用活体电穿孔和瘤内注射转染技术,将CFL1-siRNA转染入移植瘤内,采用Western blot及免疫组化法分析瘤内CFL1的表达情况。对不同治疗组进行放射治疗,观察瘤体生长情况,绘制生长曲线,进一步探讨CFL1在体内与胶质瘤放射抵抗的关系。应用 Y-27632 阻断 RhoA-ROCKⅡ-LIMKⅡ 途径;应用 CK-666 阻断Cdc42-NWASP-Arp2/3 及 Cdc42-MRCKα-Arp2/3 途径;应用 PAK1-shRNA,阻断 Rac-PAK-LIMKⅡ 及 Cdc42-PAK-LIMKⅡ 途径;应用 MRCKα-shRNA 阻断Cdc42-MRCKα-LIMKⅡ 及 Cdc42-MRCKα-Arp2/3 途径;放射治疗后,应用Western Blot分析CFL1表达变化,MTT法分析细胞活力,划痕实验分析细胞迁移能力,Transwell小室法分析细胞侵袭能力,研究CFL1介导的U251细胞放射抵抗机制。结果:RR-U251细胞中CFL1的表达量增高,与正常U251细胞比较具有显著差异(p0.001);RR-U251细胞的相对生存率、迁移能力及侵袭能力均上升,与正常U251细胞相比具有显著差异(p0.05);放射治疗后RR-U251细胞阻滞于G2/M期的细胞较U251细胞减少,放射敏感性降低。当抑制U251细胞、RR-U251细胞和CFL1过表达的U251细胞中CFL1表达时,细胞的相对生存率降低、侵袭能力减弱,阻滞于G2/M期的细胞增多,细胞凋亡增多,放射敏感性增加,与对照组比较具有显著差异(p0.05);CFL1过表达的U251细胞的相对存活率、迁移能力以及侵袭能力均上升,阻滞于G2/M期的细胞减少,与正常U251细胞相比具有显著性差异(p0.05),放射敏感性降低。Western Blot及免疫组化结果显示,转染CFL1-siRNA的移植瘤内CFL1表达下降。瘤内转染CFL1-siRNA联合放射治疗,肿瘤生长受到明显抑制。应用ROCK抑制剂Y-27632或Arp2/3抑制剂CK-666,CFL1表达下降,RR-U251细胞的相对生存率、迁移能力、侵袭能力下降,与对照组比较具有显著差异(p0.05),放射敏感性增加;抑制PAK1或MRCKα表达,CFL1表达无明显变化,RR-U251细胞的相对生存率、迁移能力、侵袭能力下降,与对照组比较具有显著差异(p0.05),放射敏感性增加。结论:降低U251细胞中CFL1的表达,可以提高胶质瘤的放射敏感性;调节RhoA-ROCKⅡ-LIMKⅡ,Cdc42-NWASP-Arp2/3 及 Cdc42-MRCKα-Arp2/3 途径中ROCK和Arp2/3,对胶质瘤放射敏感性产生影响,并与CFL1有关;调节Rac-PAK-LIMKⅡ 及 Cdc42-PAK-LIMKⅡ 通路中 PAK1,调节 Cdc42-MRCKα-LIMKⅡ及Cdc42-MRCKα-Arp2/3通路中MRCKα对胶质瘤放射敏感性产生影响,但可能与CFL1无关。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R730.55;R739.4

【参考文献】