HER2靶向相变型高分子超声造影剂的制备及其对乳腺癌细胞的寻靶及抑制作用初步研究

发布时间：2020-07-05 21:43

【摘要】：第一部分HER2靶向相变型高分子超声造影剂的制备及其特性研究目的制备一种新型相变型血管外靶向超声造影剂——包裹液态氟碳的HER2靶向高分子纳米球，并考察其理化性质、相变能力及显影效果。1 方法首先采用单乳化法制备包裹液态氟碳(PFH)的高分子PLGA纳米球(PFH-PLGA)，然后通过碳二亚胺化学连接法将靶向HER2的特异性抗体曲妥珠单克隆抗体（trastuzumab）连接到纳米球表面，制备成靶向纳米球（PFH-PLGA-tra）；检测其形态、粒径、表面电位等一般性质；免疫荧光法及流式细胞术检测trastuzumab与纳米球连接情况；体外加热法考察所包裹液态氟碳的相变情况；体外凝胶模型观察纳米球增强超声显影效果。结果靶向液态氟碳造影剂光镜下呈球形，形态规则，大小均一，平均粒径为(261±28)nm，平均表面电位为(-2.92±0.83) mv；免疫荧光法显示，trastuzumab被成功地连接到了纳米球上，流式细胞术显示靶向造影剂抗体连接率高达98.07％；体外热相变实验示，较多纳米球发生了液气相变，成为粒径较大的微泡；体外凝胶显影实验示，靶向造影剂在高温中（80摄氏度）的回声灰阶值较室温中的灰阶值明显增强(P0.05)。结论通过单乳化法和碳二亚胺化学连接法成功制备了靶向HER2的液态氟碳高分子超声造影剂，其粒径较小，抗体连接率较高，具有相变潜能，有望成为HER2阳性肿瘤血管外显影、治疗的理想造影剂。第二部分HER2靶向相变型高分子超声造影剂对乳腺癌细胞的寻靶及抑制作用的初步研究目的制备HER2靶向新型相变型高分子超声造影剂，评价其体外肿瘤细胞寻靶能力及对肿瘤细胞的抑制作用。方法采用单乳化法及碳二亚胺化学连接法制备HER2靶向相变型高分子超声造影剂。体外培养经稳定转染HER2/neu质粒的人乳腺癌MCF-7细胞；体外寻靶实验观察靶向造影剂与MCF-7细胞的结合情况，并用流式细胞术进行半定量分析；MTT法评价靶向超声造影剂对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制率的影响；流式细胞技术检测靶向造影剂对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率的影响。结果成功制备了靶向HER2的相变型高分子超声造影剂；体外寻靶实验显示，该靶向造影剂较多并且牢固的聚集在表达HER2的MCF-7细胞表面，对照组未见造影剂和MCF-7细胞的结合现象；流式细胞术显示，靶向造影剂与MCF-7细胞的平均连接率高达（98.51±1.32）%，远远高于抗体封闭组和非靶向造影剂组；MTT法结果显示靶向造影剂对乳腺癌MCF-7细胞的12h、24h、48h的平均抑制率分别为（10.25±2.01）%、（17.96±1.64）%、（39.64±1.27）%，非靶向造影剂组对乳腺癌MCF-7细胞的12h、24h、48h的平均抑制率分别为（4.12±0.63）%、（5.81±0.58）%、（8.13±0.78）%，并且12h和24h靶向造影剂组抑制率均高于非靶向造影剂组，差异具有统计学意义(P0.05)；流式细胞术结果显示靶向造影剂组对MCF-7细胞的凋亡率[（38.67±1.44）%]明显高于非靶向造影剂组[（6.91±0.52）%]和空白对照组[（3.20±0.21）%]，差异具有统计学意义(P0.05)。结论靶向HER2的相变型高分子超声造影剂对HER2阳性肿瘤细胞具有较强的体外靶向能力，并能明显抑制HER2阳性的肿瘤细胞的增殖生长，促进细胞的凋亡，有望成为HER2阳性肿瘤靶向诊疗的理想分子探针。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R445.1;R737.9
【图文】：

分布图,超声造影剂,靶向,高分子

图 1.1 靶向高分子超声造影剂光学显微镜(a)及荧光显微镜(b)图(×800)Fig.1.1 Light microscope image(a) and fluorescence microscope image(b) of HER2-targepolymer ultrasound contrast agent (×800)a b图 1.2 靶向高分子超声造影剂粒径(a)及电位(b)分布图Fig 1.2 Size(a) and Zeta potential(b) distribution of HER2-targeted polymer ultrasou

分布图,超声造影剂,靶向,高分子

图 1.1 靶向高分子超声造影剂光学显微镜(a)及荧光显微镜(b)图(×800)Fig.1.1 Light microscope image(a) and fluorescence microscope image(b) of HER2-targetedpolymer ultrasound contrast agent (×800)a b

表面抗体,激光共聚焦显微镜,红色荧光,叠加图

图 1.3 激光共聚焦显微镜观察靶向造影剂表面抗体连接情况：靶向造影剂表面呈现红色荧光(a)与绿色荧光(b); a 与 b 的叠加图为黄色荧光(c)Fig 1.3 Trastuzumab connectivity of Targeted contrast agent under Confocal microscopy:Red fluorescence(a) and green fluorescence(b) around the targeted contrast agent;superposition of a and b(c)

【参考文献】