早期缺血性脑水肿的AQP4表达规律与磁共振成像机制的相关性研究
发布时间：2020-09-03 21:01
目的 探讨水通道蛋白-4(AQP4)在早期缺血性脑水肿过程中的表达规律。 方法 将40只Wistar大鼠，随机分为3组，即对照组4只、假手术组12只和手术组(大脑中动脉栓塞—MCAO)24只。将后2组再进一步分为6小组(每小组各2只和4只)，在术后15 min、30 min、1 h、3 h、6 h及24 h等时间点，分别采用免疫组化(△S)、原位杂交(α)和图像分析技术测定梗塞区AQP4的表达水平，同时用光镜和透射电镜(TEM)进行对应部位的病理观察。对照组不手术；假手术组不栓塞，其余操作同手术组。 结果 AQP4基因和蛋白变化具有一致性(r=0.949)。对照组与假手术组比较无显著性差异(t=1.67，P0.05)。手术组与对照组比较有显著性差异(t=16.8，P0.01)。AQP4表达丰富的部位在脉络丛、室管膜细胞、垂体、海马和梗塞区周的胶质细胞。在24 h内，AQP4表达出现2个高峰和中间平台期。在15 min～1 h， AQP4表达明显增强，呈线性增加。病理显示此期主要为细胞内水肿。随着时间推移(即1 h～6 h)，AQP4表达出现相对平台期，对应的病理改变为血管源性水肿。 WP=14 6 h后，AQP4表达又呈现第二个高峰期，病理变化主要是组织坏死。 结论 早期缺血性脑组织经历了从细胞内水肿，发展到血管源性水肿，最终出现组织坏死的病理过程。AQP4表达增强与细胞内水肿和梗死密切相关，尤其可能是形成超早期脑缺血性细胞内水肿的重要因素之一，AQP4表达与血管源性水肿无明显关系。 关键词 脑水肿;脑缺血;动物;实验;病理学;水通道蛋白-4
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R445.2
【部分图文】：
线图 1 ICA: 颈内动脉; ECA: 颈外动脉; PComA: 大脑后动脉; MCA: 大脑中动脉表 1-2 每小组大鼠在指标观察中的分配情况(只)Tab 1-2 Distribution and number of the rats in the experiment of the observed itemitemgroupHistologicexamination(HE,TEM)Molecularbiologicexamination(IC,ISH)controlpseudo-operationoperation211213五、病理观察石蜡包埋，切片厚 6μm，常规 HE 染色，光镜下观察并显微照像。常规透电镜标本制备，铅铀双染色，在 EX-2000 型透射电镜下观察并照像。
TE 92.3 ms。T1WI：TR 300ms，TE 9ms。。参考刘梅丽等[4]方法，将 DWI 上呈高信号，而信号的脑组织定义为影像半暗带；将在 DWI 和 梗死区。以年轮状方式由外向内测定上述 2 个区)(如图 3-1)。依据公式：ADC =In(S1/S0)/(bo-b1)， b=0 的信号强度，In为自然对数，ADCR =(患侧 。按照公式 rs =(梗塞区面积/同侧半球总面积)×1信号最大层面的相对面积(rs-DWI，rs-T2WI)。以后，用 1％的戊巴比妥纳过量麻醉动物，用经 D聚甲醛和 1%氯化三苯四氮唑(TTC)混合液经心灌影像半暗带组织对应切片进行病理及分子生物学实
三、通道蛋白在脑的分布与功能在哺乳动物组织中已鉴定出十种水通道蛋白，统称 Aquaporin(AQP)。不同水通道蛋白 cDNA 有高度同源性。水通道蛋白的主要功能是转运水。根据 AQP 对水和其它溶质的通透性，Ishibashi[15]将 AQP 家族分为两个亚族：AQP0、AQP1、AQP2、AQP04、AQP5、 AQP6、AQP8 为一亚族，AQP3、AQP7、AQP9 属于另一亚族。前者为高度选择性水通透性，即除水之外不转运其它小分子溶质；而后线图 1 水通道蛋白在细胞膜上的解剖结构图中 A、C 和 E 襻位于细胞膜外，B 和 D 襻以及N-和 C-末端在细胞膜内。两个括号代表重复序列。NPA 表示天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸三个保守氨基酸。G94 和 C189 分别代表该位置上的甘氨酸和半胱氨酸。(引自 Preston GM, Agre P. Isolation of thecDNA for erythrocyte integral membrane protein of28 kilodaltons: member of an ancient channel family.Proc Natl Acad Sci USA, 1991,88:11110-11114)线图 2 水通道蛋白的晶体结构图中标尺为 1nm(10 )。数字 1~6 为高电子密度区,代表水通道的跨膜区段。图中显示 AQP1 的四聚体结构，中央代表水通道小孔的入口。(引自 Mitra AK,van Hoek AN, Wiener M, et al. The CHIP 28 waterchannel visualized in ice by electron cryst-allography.Nature Struct Biol, 1995, 2(9):726-729)
本文编号：2811952
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R445.2
【部分图文】：
线图 1 ICA: 颈内动脉; ECA: 颈外动脉; PComA: 大脑后动脉; MCA: 大脑中动脉表 1-2 每小组大鼠在指标观察中的分配情况(只)Tab 1-2 Distribution and number of the rats in the experiment of the observed itemitemgroupHistologicexamination(HE,TEM)Molecularbiologicexamination(IC,ISH)controlpseudo-operationoperation211213五、病理观察石蜡包埋，切片厚 6μm，常规 HE 染色，光镜下观察并显微照像。常规透电镜标本制备，铅铀双染色，在 EX-2000 型透射电镜下观察并照像。
TE 92.3 ms。T1WI：TR 300ms，TE 9ms。。参考刘梅丽等[4]方法，将 DWI 上呈高信号，而信号的脑组织定义为影像半暗带；将在 DWI 和 梗死区。以年轮状方式由外向内测定上述 2 个区)(如图 3-1)。依据公式：ADC =In(S1/S0)/(bo-b1)， b=0 的信号强度，In为自然对数，ADCR =(患侧 。按照公式 rs =(梗塞区面积/同侧半球总面积)×1信号最大层面的相对面积(rs-DWI，rs-T2WI)。以后，用 1％的戊巴比妥纳过量麻醉动物，用经 D聚甲醛和 1%氯化三苯四氮唑(TTC)混合液经心灌影像半暗带组织对应切片进行病理及分子生物学实
三、通道蛋白在脑的分布与功能在哺乳动物组织中已鉴定出十种水通道蛋白，统称 Aquaporin(AQP)。不同水通道蛋白 cDNA 有高度同源性。水通道蛋白的主要功能是转运水。根据 AQP 对水和其它溶质的通透性，Ishibashi[15]将 AQP 家族分为两个亚族：AQP0、AQP1、AQP2、AQP04、AQP5、 AQP6、AQP8 为一亚族，AQP3、AQP7、AQP9 属于另一亚族。前者为高度选择性水通透性，即除水之外不转运其它小分子溶质；而后线图 1 水通道蛋白在细胞膜上的解剖结构图中 A、C 和 E 襻位于细胞膜外，B 和 D 襻以及N-和 C-末端在细胞膜内。两个括号代表重复序列。NPA 表示天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸三个保守氨基酸。G94 和 C189 分别代表该位置上的甘氨酸和半胱氨酸。(引自 Preston GM, Agre P. Isolation of thecDNA for erythrocyte integral membrane protein of28 kilodaltons: member of an ancient channel family.Proc Natl Acad Sci USA, 1991,88:11110-11114)线图 2 水通道蛋白的晶体结构图中标尺为 1nm(10 )。数字 1~6 为高电子密度区,代表水通道的跨膜区段。图中显示 AQP1 的四聚体结构，中央代表水通道小孔的入口。(引自 Mitra AK,van Hoek AN, Wiener M, et al. The CHIP 28 waterchannel visualized in ice by electron cryst-allography.Nature Struct Biol, 1995, 2(9):726-729)
【参考文献】
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本文编号：2811952
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