131 I标记VEGF siRNA抑制人肝细胞癌生长的体内实验研究
发布时间：2020-12-07 21:52
目的：研究131I标记VEGFsiRNA在BALB/c裸鼠体内的血液动力学、生物分布以及对BALB/c裸鼠皮下荷人肝细胞癌生长的抑制作用，以建立体内肝细胞癌核素显像、基因和放射性核素靶向协同治疗体系。方法：以人肝细胞癌细胞株HepG2细胞悬液建立BALB/c裸鼠皮下肝细胞癌模型。设计人血管内皮生长因子（VEGF）小干扰RNA，利用BH试剂间接Bolton-Hunter法使VEGFsiRNA标记上131I，以氧化铁超顺磁性纳米颗粒（SPIO）SilenceMag包裹131I-VEGFsiRNA。然后进行：（1）血液动力学研究：6只67w龄、瘤体10.0mm×10.0mm左右的皮下荷HepG2肝细胞癌BALB/c裸鼠（简称荷瘤裸鼠）随机分成两组（每组3只），一组肿瘤部位覆以小磁体（0.8T）作为外加磁场组，另一组不加外加磁场作为非外加磁场组。以尾静脉注射131I-VEGFsiRNA-SilenceMag（0.2ml，100uCi，1.5nmolsiRNA）后，分别在第0.5h、1....
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HepG2人肝癌细胞图：A、B两图分别为100×和200×图，可见HepG2人肝癌细胞呈梭形，细胞轮廓清晰，贴壁生长，指数生长期成簇聚集
图 2 BA L B / c 裸鼠 臀部 皮 下荷 He p G2 肝细 胞癌 实 体图 ， 图 中箭 头所 指 为肿 瘤 。213 1 I标记 2. 1 13 1 I标记 B H试剂 情 况 N a13 1 I 的比 活 度很 重 要， 50 μ l 体积 内放 射 性 活度 大 于 1. 0 mC i 时13 1 I 标记 B H 试剂 效 率较 好， 反 应体 积 过 大会 影 响标 记率 ， 本 实 验中 这一 步 反应 体 积 均能 够 保证 小 于 20 0 μl 。反 应前 N a13 1 I 液比 活 度为 1 . 0~ 2. 0 mC i/ 5 0 μl 时容 易 操 作 且标 记 率 也 较稳 定 。 2. 2 13 1 I- B H偶联 VE GF s iR NA 的情 况 13 1 I- BH 与 VE GF si R N A 偶 联反 应 体 积 过高 会 降低 偶联 率 ，所 以D M F 溶 解氮 气 吹 干 的1 3 1 I - BH 晶体 是 本步 骤 中 偶 联体 积 的关 键 ， 过少 的 D M F 使13 1 I - BH 晶体 溶解 不 全 ， 20 μl DM F 溶解 两次 能 将 大部 分 13 1 I - BH 晶体 溶 解 ，偶 联 率 见表 2 。 表 11 31 I 标记 率、 偶 联率 、 利 用率 以 及 s iR N A 回 收 率等 情 况。 N a13 1 I 液 比活 度 （m C i/ 5 0 μl ）13 1 I- BH 标 记率 （ % ）13 1 I 与V E GF si R N A偶 联率 （% ） 13 1 I 利用 率（ % ）
图 3 A 为1 31 I- VE GF s iR N A -S i l e n c e M a g 产物 点 样于 薄层 层 析硅 胶 板， 以 丙酮 和 生理 盐 水（ 1: 1 ）为 展开 剂， 层析 后放 射 性 层 析 扫描 仪的 扫 描图 ；B 为13 1I- VE GF si R N A -S i le n c e M a g 产 物 点 样于 新 华 一 号 滤纸， 以甲 醇 和 5% 醋 酸 铵（ 1 : 1 ）为 展 开剂 ， 层析 后放 射 性层 析 扫描 仪 的 扫描 图。 313 1 I -V E GF si R N A- S il e nc e Ma g 在B AL B / c裸鼠 体 内 血液 动 力 学 外加 磁场 组 与非 外 加 磁场 组 给 药 后血 液 cp m 值均 随 时间 推 移 逐渐 降 低 ， 两组 血 液 半衰 期 分别 约为 3 .2 h和 4 .4 h ，见 图 4 。
本文编号：2903952
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HepG2人肝癌细胞图：A、B两图分别为100×和200×图，可见HepG2人肝癌细胞呈梭形，细胞轮廓清晰，贴壁生长，指数生长期成簇聚集
图 2 BA L B / c 裸鼠 臀部 皮 下荷 He p G2 肝细 胞癌 实 体图 ， 图 中箭 头所 指 为肿 瘤 。213 1 I标记 2. 1 13 1 I标记 B H试剂 情 况 N a13 1 I 的比 活 度很 重 要， 50 μ l 体积 内放 射 性 活度 大 于 1. 0 mC i 时13 1 I 标记 B H 试剂 效 率较 好， 反 应体 积 过 大会 影 响标 记率 ， 本 实 验中 这一 步 反应 体 积 均能 够 保证 小 于 20 0 μl 。反 应前 N a13 1 I 液比 活 度为 1 . 0~ 2. 0 mC i/ 5 0 μl 时容 易 操 作 且标 记 率 也 较稳 定 。 2. 2 13 1 I- B H偶联 VE GF s iR NA 的情 况 13 1 I- BH 与 VE GF si R N A 偶 联反 应 体 积 过高 会 降低 偶联 率 ，所 以D M F 溶 解氮 气 吹 干 的1 3 1 I - BH 晶体 是 本步 骤 中 偶 联体 积 的关 键 ， 过少 的 D M F 使13 1 I - BH 晶体 溶解 不 全 ， 20 μl DM F 溶解 两次 能 将 大部 分 13 1 I - BH 晶体 溶 解 ，偶 联 率 见表 2 。 表 11 31 I 标记 率、 偶 联率 、 利 用率 以 及 s iR N A 回 收 率等 情 况。 N a13 1 I 液 比活 度 （m C i/ 5 0 μl ）13 1 I- BH 标 记率 （ % ）13 1 I 与V E GF si R N A偶 联率 （% ） 13 1 I 利用 率（ % ）
图 3 A 为1 31 I- VE GF s iR N A -S i l e n c e M a g 产物 点 样于 薄层 层 析硅 胶 板， 以 丙酮 和 生理 盐 水（ 1: 1 ）为 展开 剂， 层析 后放 射 性 层 析 扫描 仪的 扫 描图 ；B 为13 1I- VE GF si R N A -S i le n c e M a g 产 物 点 样于 新 华 一 号 滤纸， 以甲 醇 和 5% 醋 酸 铵（ 1 : 1 ）为 展 开剂 ， 层析 后放 射 性层 析 扫描 仪 的 扫描 图。 313 1 I -V E GF si R N A- S il e nc e Ma g 在B AL B / c裸鼠 体 内 血液 动 力 学 外加 磁场 组 与非 外 加 磁场 组 给 药 后血 液 cp m 值均 随 时间 推 移 逐渐 降 低 ， 两组 血 液 半衰 期 分别 约为 3 .2 h和 4 .4 h ，见 图 4 。
本文编号：2903952
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