AuNPs-PEG-AS1411纳米粒子对肿瘤细胞辐射敏感性影响

发布时间：2017-04-30 22:00

  本文关键词：AuNPs-PEG-AS1411纳米粒子对肿瘤细胞辐射敏感性影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究课题分别用MPA-PEG、PEG-AS1411、PEG-c Apt来修饰纳米金粒子,制备得Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子。通过检测不同浓度Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子联合X射线照射后对人宫颈癌He La细胞存活率影响和Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子在人宫颈癌He La细胞及细胞核的分布,及观察经Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子预处理联合X射线对He La细胞DNA损伤的影响,探讨Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子对人宫颈癌He La细胞辐射敏感性影响。方法:采用柠檬酸盐还原法还原氯金酸制备纳米金粒子,并分别用MPA-PEG、PEG-AS1411、PEG-c Apt来修饰纳米金粒子,制备得Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子;用纳米粒度及zeta电位分析仪检测其粒径;紫外可见近红外分光光度计检测其吸收光谱;电感耦合等离子体高分辨质谱仪检测其浓度。采用CCK-8法检测细胞活性,研究Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子对人宫颈癌He La细胞的急性毒性作用;克隆形成法检测Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子对He La细胞的长期毒性作用。采用克隆形成法检测不同浓度Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子联合X射线照射后对人宫颈癌He La细胞存活率影响;采用电感耦合等离子体高分辨质谱仪检测每个He La细胞及细胞核对Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子的吸收量。采用γ-H2AX荧光斑点法检测DNA双链断裂数量,研究Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子对X射线导致的He La细胞DNA双链断裂影响。结果:⑴采用柠檬酸盐还原法还原氯金酸制备尺寸均匀的纳米金粒子(Au NPs),粒径大小为44nm;分别用MPA-PEG、PEG-AS1411、PEG-c Apt对其修饰后制得Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子,其粒径大小分别为48nm、50nm、50nm。⑵CCK-8实验结果显示:不同浓度Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子分别处理人宫颈癌He La细胞24h、48h、72h后,He La细胞存活率均大于95%,表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子的急性细胞毒性很小。采用细胞克隆形成法检测不同浓度的Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt三种纳米金粒子对He La细胞的长期的毒性作用。结果表明:随着药物浓度的增加,在不同浓度的Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt的作用下,He La细胞的存活率明显降低。当Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt浓度达到10mg/L时,He La细胞的存活率分别为84.7%、78.2%、80.6%,表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt对He La细胞具有长期毒性作用,浓度越高,毒性越大。⑶每个He La细胞及细胞核对Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt的吸收结果显示:当药物培养浓度达到10mg/L时,He La细胞及细胞核对Au NPs-PEG-AS1411的吸收量最大,Au NPs-PEG-c Apt与Au NPs@MPA-PEG的结果相差很小。⑷克隆形成实验检测细胞受辐照后,细胞存活率显示:Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt在浓度为0~10mg/L范围内时,不同浓度药物联合X射线照射后,细胞存活率降低,具有剂量-效应关系。由辐照剂量-细胞存活曲线可知,低剂量区“肩区”部分缩小变窄,直线斜率部分变大,且各个计量点的存活率均低于正常对照组(P0.05),即表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt对He La细胞具有辐射增敏作用。当Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS411、Au NPs-PEG-c Apt浓度达到10mg/L时,其增敏比分别为:1.12、1.19、1.12。其中,Au NPs-PEG-AS411的放射增敏比最大,达到1.19。⑸DNA损伤实验结果显示:经过Au浓度为10mg/L的Au纳米粒子预处理的细胞细胞核内DNA双链断裂所产生的荧光斑点数量比单纯照射组细胞细胞核内DNA双链断裂所产生的荧光斑点数多,Au NPs-PEG-AS1411处理组差别最大。当照射剂量为8Gy时,Au NPs-PEG-AS1411组细胞核内DNA双链断裂所产生的荧光斑点数为34.69±3.04,而单纯照射组细胞核内DNA双链断裂所产生的荧光斑点数为20.78±2.73,Au NPs@MPA-PEG组与Au NPs-PEG-c Apt组分别为26.05±1.86、27.05±2.16。Au NPs@MPA-PEG组与Au NPs-PEG-c Apt组相比没有明显差别,Au NPs-PEG-AS1411组DNA双链断裂数量明显比Au NPs@MPA-PEG组、Au NPs-PEG-c Apt组多。结论:⑴在常温条件下,分别制得粒径为44nm、48nm、50nm、50nm的Au NPs、Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子。⑵Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt纳米粒子对He La细胞的增殖没有表现出明显抑制作用,表明粒子急性细胞毒性很小。在克隆实验中,当Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt浓度达到10mg/L时,He La细胞的存活率分别为84.7%、78.2%、80.6%,表明Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt对He La细胞具有长期毒性作用。⑶He La细胞及细胞核对Au NPs-PEG-AS1411的吸收量最多。表明用AS1411修饰纳米金粒子,可以增加细胞对纳米金粒子的吸收。⑷在Au浓度为0~10mg/L范围内时,Au NPs@MPA-PEG、Au NPs-PEG-AS1411、Au NPs-PEG-c Apt对He La细胞具有辐射增敏作用。当Au浓度达到10mg/L时,Au NPs-PEG-AS411的放射增敏比最大,达到1.19。⑸经过Au纳米粒子预处理组细胞DNA双链断裂数量比单纯照射组多。Au NPs-PEG-AS1411组最多,Au NPs@MPA-PEG组与Au NPs-PEG-c Apt组相比没有明显差别。
【关键词】：纳米金粒子 AS1411 cApt HeLa细胞 细胞增殖 细胞吸收量 辐射敏感性 DNA损伤
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-14
• 前言14-20
• 第一部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt的制备20-30
• 一、实验材料和方法20-22
• 1 试剂和仪器20-21
• 2 试剂配制21
• 3 实验方法21-22
• 二、实验结果22-27
• 三、讨论27-30
• 第二部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt对宫颈癌HeLa细胞的毒性研究30-37
• 一、实验材料和方法30-33
• 1 试剂和仪器30
• 2 试剂配制30-31
• 3 细胞株31
• 4 细胞冻存、复苏与培养31
• 5 CCK-8 法检测细胞的存活率31-32
• 6 克隆形成法检测细胞的存活率32-33
• 7 统计学分析33
• 二、实验结果33-35
• 三、讨论35-37
• 第三部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt的细胞吸收量37-44
• 一、实验材料和方法37-40
• 1 试剂和仪器37
• 2 试剂配制37-38
• 3 细胞株38
• 4 细胞冻存、复苏与培养38-39
• 5 实验方法39-40
• 6 统计学分析40
• 二、实验结果40-42
• 三、讨论42-44
• 第四部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt联合X射线对HeLa细胞存活率影响44-53
• 一、实验材料和方法44-47
• 1 试剂和仪器44
• 2 试剂配制44-45
• 3 细胞株45
• 4 细胞冻存、复苏与培养45
• 5 实验方法45-47
• 6 统计学分析47
• 二、实验结果47-50
• 三、讨论50-53
• 第五部分 AuNPs@MPA-PEG、AuNPs-PEG-AS1411、AuNPs-PEG-cApt联合X射线对HeLa细胞DNA损伤的影响53-60
• 一、实验材料和方法53-55
• 1 试剂和仪器53
• 2 试剂配制53-54
• 3 细胞株54
• 4 细胞冻存、复苏与培养54
• 5 实验方法54-55
• 6 统计学分析55
• 二、实验结果55-58
• 三、讨论58-60
• 结论60-61
• 参考文献61-68
• 综述 纳米金在生物医学中的应用68-80
• 参考文献74-80
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文80-81
• 中英文对照缩略词表81-82
• 致谢82-83

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王楠;徐淑坤;王文星;;纳米金生物探针及其应用[J];化学进展;2007年Z1期

2 唐芳琼,孟宪伟,陈东,冉均国,苟立,郑昌琼　;纳米颗粒增强的葡萄糖生物传感器[J];中国科学(B辑);2000年02期

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本文编号：337633