miR-21调控大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的机制研究

发布时间：2017-08-11 05:09

  本文关键词：miR-21调控大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的机制研究

  更多相关文章： 颌骨纤维化 骨髓间充质细胞 肌成纤维细胞 转化生长因子-β1 miRNA-21

【摘要】：研究报导放疗诱导的纤维萎缩机制在放射性颌骨坏死中起重要作用,但具体的调控机制尚不明确。通过多种纤维化疾病研究的文献发现mi R-21与TGF-β1在纤维化过程中参与调控作用,因此本实验通过研究大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞分化的过程,探讨mi R-21是否调控了TGF-β1对大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞的诱导分化过程。此研究有望深入阐述放射性颌骨坏死中颌骨纤维萎缩机制的具体调控机制,为进一步治疗和预防提供新靶点。目的:检测TGF-β1诱导大鼠BMSCs成纤维细胞和肌成纤维细胞分化过程中mi R-21的基因表达,同时探讨mi R-21在体外大鼠BMSCs成纤维细胞分化过程中的调控作用。为治疗颌骨纤维化提供了一个新的靶点。方法:1.原代获得大鼠骨髓间充质细胞,并进行分离纯化培养。并用一定浓度的TGF-β1对大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞进行诱导分化。2.Real-time PCR检测大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞诱导过程中mi R-21基因表达水平差异。3.利用mi R-21基因模拟物mimics和inhibitor对大鼠骨髓间充质细胞进行转染,使其过表达或者下调,Real-time PCR和Western blot检测肌成纤维细胞的相关基因和蛋白α-SMA的表达,观察mi R-21对大鼠骨髓间充质细胞的生物学影响。3.mi R-21基因的mimics模拟物转染大鼠骨髓间充质细胞后,加入一定浓度的TGF-β1,Western blot和免疫细胞化学法检测肌成纤维细胞的相关蛋白α-SMA的表达,从而明确mi R-21对大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞的调控作用是否与TGF-β1通路相关。结果:本实验发现一定浓度的TGF-β1可以诱导大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞分化,在此过程中mi R-21基因的表达上调,并且具有时间依赖性和剂量依赖性。一定浓度的TGF-β1处理后mi R-21表达升高且在处理后的48h表达量达到最高峰值。当TGF-β1的浓度为5ng/ml时,mi R-21的表达最高。人工合成的mi R-21 mimics转染至大鼠BMSCs后能够有效提高mi R-21表达量从而促进了细胞α-SMA基因和蛋白的表达,而人工合成的mi R-21 inhibitor转染后能够有效下调mi R-21表达量从而降低了细胞α-SMA基因和蛋白的表达;mi R-21 mimics增加了TGF-β1刺激大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的作用,表明mi R-21为促纤维化的基因。结论:本研究发现,mi R-21能够正调控TGF-β1诱导的大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞分化并高表达α-SMA。本研究为纤维萎缩机制的基因水平研究提供了初步理论依据,为抗颌骨纤维化的基因治疗提出了新的理论。
【关键词】：颌骨纤维化 骨髓间充质细胞 肌成纤维细胞 转化生长因子-β1 miRNA-21
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.55;R739.91
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 缩略语表13-15
• 绪论15-21
• 国内外研究现状15-19
• 本课题研究基础19-21
• 第一部分 大鼠骨髓间充质细胞的分离培养及多向分化能力鉴定21-37
• 1 材料与方法21-25
• 2 实验步骤25-30
• 3 结果30-33
• 4 讨论33-35
• 5 结论35-37
• 第二部分 外源性TGF-β1 诱导大鼠骨髓间充质细胞MIR-21表达的体外研究37-46
• 1 材料与方法37-38
• 2 实验步骤38-40
• 3 实验结果40-42
• 4 讨论42-45
• 5 结论45-46
• 第三部分 MIR-21调控大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞分化的体外研究46-59
• 1 材料与方法46-47
• 2 实验步骤47-49
• 3 实验结果49-55
• 4 讨论55-58
• 5 结论58-59
• 结束语59-62
• 全文总结59-60
• 工作创新点60-61
• 进一步工作计划61-62
• 参考文献62-67
• 第一作者文章67-68
• 个人简历68-70
• 致谢70-71

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王春玲;邢新;;肌成纤维细胞与瘢痕[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年06期

2 谷丽,朱元珏;特发性肺间质纤维化与肺肌成纤维细胞[J];国外医学.呼吸系统分册;2005年05期

3 张树欣;肌成纤维细胞与肿瘤[J];第一军医大学学报;1990年S1期

4 汪琴;肌成纤维细胞和伤口收缩的关系(二)[J];国外医学(物理医学与康复学分册);1999年04期

5 代天国;何悦;;肌成纤维细胞与颌骨放射性骨坏死[J];中国口腔颌面外科杂志;2014年04期

6 张鹏程;黄荣桂;;肾小管间质纤维化进程中肌成纤维细胞的来源[J];医学研究杂志;2013年03期

7 裴娟;覃远汉;;肌成纤维细胞与肾小球硬化[J];医学综述;2006年22期

8 漆雪梅,刘流;肌成纤维细胞与创伤的关系[J];中华医学美容杂志;2001年02期

9 王周南，，孙东旭,赵秉化,李光;大鼠伤口愈合过程中营养不良对肌成纤维细胞及破纤维细胞的影响[J];中国实验动物学杂志;1994年02期

10 李维才;;肌成纤维细胞及其肿瘤[J];遵义医学院学报;1991年04期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 高亚兵;彭瑞云;谷庆阳;秦全红;杨红;王德文;;肌成纤维细胞在放射复合伤口愈合中变化规律的研究[A];面向二十一世纪的生物医学体视学和军事病理学论文摘要汇编[C];2000年

2 毛志刚;方勇;;空间形态结构对肌成纤维细胞的影响[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

3 章伏生;;肌成纤维细胞在皮肤瘢痕形成过程中的作用[A];浙江省第十六届烧伤外科学术会议论文汇编[C];2006年

4 毛志刚;陆树良;王西樵;刘英开;;空间形态结构对肌成纤维细胞的影响[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年

5 刘真;贾赤宇;;MicroRNA-146a在肌成纤维细胞转化过程中的调控作用[A];2011中国（威海）干细胞与组织工程治疗前沿论坛论文集[C];2011年

6 刘真;贾赤宇;;MicroRNA-146a在肌成纤维细胞转化过程中的调控作用[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年

7 郭淑杰;沈伟利;魏坚;高平进;朱鼎良;;转化生长因子-β1诱导肌成纤维细胞分化过程中基因表达变化研究[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 杨思思;真核起始因子6(eIF6)在皮肤肌成纤维细胞分化中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2015年

2 方硕;干细胞来源的外泌体对成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的调控作用及其机制研究[D];第二军医大学;2016年

3 谷丽;TGF-β_1/Smads信号转导途径在肺肌成纤维细胞分化中的作用及IFN-γ、地塞米松的影响[D];中国协和医科大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前9条

1 郭宇轩;肌成纤维细胞在放射性颌骨骨坏死发生机制中作用的初步实验研究[D];第四军医大学;2016年

2 付水霆;miR-21调控大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的机制研究[D];上海交通大学;2015年

3 刘曼丽;多西环素对体外培养的牛角膜肌成纤维细胞的生物学影响[D];广西医科大学;2012年

4 谢莉;SAHA对TGF-β诱导人胚肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响[D];南华大学;2011年

5 夏武;RNA干扰沉默STAT3基因对TGF-β_1诱导的成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响及其机制研究[D];新乡医学院;2012年

6 孙斌;百草枯致肺损伤中肌成纤维细胞的骨髓源性研究[D];四川大学;2007年

7 牟联军;肌成纤维细胞在食管癌组织中的分布及可能的病理学意义[D];汕头大学;2007年

8 郑仲余;人脐带结缔组织的肌成纤维细胞[D];暨南大学;2004年

9 董晨光;阿托伐他汀对转化生长因子-β_1诱导的大鼠肺肌成纤维细胞分化的影响[D];中国医科大学;2008年

本文编号：654335