放射性肺损伤的临床和实验研究

发布时间：2017-08-14 08:07

  本文关键词：放射性肺损伤的临床和实验研究

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【摘要】：目的:探讨肺癌患者接受常规适形放射治疗时,在发生RILI患者中,MMP-9、TIMP-1在不同照射剂量下的表达及其临床意义,分析其是否可成为RILI的预测因素。观察小鼠在高海拔地区X线照射下发生RILI小鼠模型MMP-9、TIMP-1的表达,探讨在不同照射剂量下,MMP-9、TIMP-1表达的差异;运用GSH对RILI小鼠进行药物干预,观察该药的防治作用。方法:收集青海大学附属肿瘤医院放疗科2014年3月至2015年2月首次接受放射治疗的54例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的一般资料,包括患者的年龄、性别、籍贯、民族、职业史、首诊时间、首诊症状、KPS评分、影响肺功能相关疾病史、吸烟、饮酒、饮水及饮食习惯、肿瘤病变位置、病理类型、诊断及TNM分期、治疗方案、TPS物理参数及血常规等,对发生RILI与未发生RILI的危险因素进行单因素χ2检验和多因素Logistic分析,建立RILI多因素Logistic回归模型。并对54例患者随访1年并发症发生率进行Kaplan-Meier分析。用酶联免疫吸附实验(Elisa)检测放疗前(0Gy)、中(40Gy)、后(54Gy以上)不同时间空腹静脉血中的MMP-9和TIMP-1表达含量,并判断其与RILI相关性。选取100只BALB/c系健康7~8周SPF级体重20±2 g小鼠,随机分为5组,每组小鼠20只,包括空白对照组、15 Gy单纯照射组、15 Gy+GSH照射组、30 Gy单纯照射组、30 Gy+GSH照射组,于照射前5 min腹腔注射0.5%戊巴比妥纳0.2 m L进行麻醉,放疗加GSH组于麻醉后2 min腹腔注射240 mg/m L的GSH 0.2 m L,空白组小腹腔注射等体积生理盐水作对照。进行照射的小鼠采用仰卧位固定,在小鼠胸部设定1x2 cm2照射野,用医用电子直线加速器6Mv X线,源皮距98 cm,剂量率300 c Gy/min,对小鼠进行不同剂量的一次照射,建立RILI实验小鼠动物模型。照射后1周采用颈椎脱臼法处死小鼠,获取肺组织进行切片和HE染色,判断实验小鼠是否发生RILI,以确定是否成功建立RILI实验动物模型。小鼠在照射前和照射后1、2、3周称重后取眼球获取实验血液样本,同时取肺组织标本。用100μL全血在全自动血液分析仪中分析血常规,剩余血样立即用5000转/分钟,离心10 min,取血清存于-800C冰箱待测,实验标本收集完成后,用Elisa法检测MMP-9、TIMP-1表达水平。肺组织经10%中性甲醛浸泡,经脱水、包埋、固定、切片、HE染色拍片并观看肺组织病理变化。运用AVONA分析照射后小鼠的活动度、体重变化,血常规、MMP-9、TIMP-1在不同时间不同照射剂量下表达的差异性。结果:54例肺癌患者首程接受放射治疗后,23例发生不同程度的RILI,其发生率为42.59%,1-2级16例(29.6%),3-4级7例(13.0%)。对影响RILI危险因素行χ2检验,RILI与年龄、性别、病理类型、病变位置、治疗方案、KPS评分无关联,与吸烟、COPD、V20、MLD等因素有统计学意义(P0.05)。放疗开始后短期内血象会相应下降,之后上升并保持相对平稳状态。对单因素检验有意义的危险因素进行多因素Logistic回归分析,治疗过程中合并肺炎和V20≥25%是影响RILI发生的独立危险因素(P0.05),建立Logistic回归模型为:Y=-15.58+2.71X2+4.35X4。Elisa检测肺癌患者MMP-9、TIMP-1表达,其含量在不同放疗剂量下存在统计学差异(P0.05)。剂量越高,MMP-9表达越多,与未发生RILI组比较,差异有统计学意义(P0.05)。对两组患者均随访1年,观察两组患者并发症发生率,RILI组并发症中位发生期为8.7个月,与未发生RILI组9.9个月比较,差异有统计学意义(χ2=5.78,P=0.02)。空白对照组小鼠肺泡组织结构清晰完整,未见明显的炎症细胞渗出、浸润、出血,照射后1周小鼠肺组织中可见大量炎症细胞浸润伴肺泡间隔明显水肿、出血,结构不完整,说明RILI实验小鼠动物模型建立成功。与空白组小鼠肺组织比较,单纯照射组小鼠肺组织中可见大量炎症细胞浸润伴肺泡间隔水肿、出血,肺泡壁受损伤,结构不完整。相同剂量照射下,小鼠肺组织间炎症细胞浸润、水肿,第3周较第1周更少,结构更清晰、完整,肺组织结构得到自我修复。与空白组比较,单纯照射后,小鼠活动度、红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白、TIMP-1表达均明显下降,差异有显著性统计学意义(P0.05),MMP-9表达上升(P0.05)。30Gy剂量照射小鼠后,肺组织损伤明显较15Gy组损伤严重,各指标与15Gy单纯照射组比较有统计学差异(P0.05)。随着照射后时间的延长,白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白、TIMP-1上升,MMP-9下降,与照射前比较差异有统计学意义(P0.05)。使用GSH药物干预后,小鼠RILI程度明显下降。相同照射剂量下,GSH组小鼠肺组织损伤明显较单纯组减轻,并且低剂量照射下,GSH防治作用更强。结论:MMP-9、TIMP-1表达水平随着放射剂量增加、照射范围增大而增加,可作为放疗前判断是否发生RILI重要的可预测指标之一。
【关键词】：放射性肺损伤 危险因素 临床研究 药物干预 实验研究
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2;R730.55
【目录】：

• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 附录 中英文缩略词对照14-16
• 研究过程技术路线图16-18
• 第一部分：肺癌患者MMP-9、TIMP-1 表达及生物学意义研究18-47
• 引言18-21
• 材料与方法21-29
• 1 材料21-24
• 1.1 病例来源21
• 1.2 纳入标准21
• 1.3 排除标准21
• 1.4 诊断标准21-22
• 1.5 急性放射性肺炎分级标准22-23
• 1.6 Karnofsky[20]（卡氏）功能状态评分23
• 1.7 疗效判定标准23
• 1.8 研究主要设备与试剂23-24
• 2 方法24-28
• 2.1 研究方法24-26
• 2.2 放疗实施流程图26-27
• 2.3 实验方法（Elisa法）27-28
• 2.4 定义相关变量28
• 3 统计学28-29
• 结果29-40
• 1 RILI发生情况29
• 2 细胞因子表达29-33
• 2.1 MMP-9、TIMP-1 在肺癌患者放疗后中的表达29-30
• 2.2 两组患者放疗后不同时间MMP-9、TIMP-1 表达30-33
• 2.3 MMP-9、TIMP-1 与RILI的关系33
• 3 影响RILI的因素33-37
• 3.1 54例肺癌患者的基本资料33-35
• 3.2 RILI的危险因素35-36
• 3.3 V20、MLD与RILI的关系36
• 3.4 影响RILI危险因素的Logistic分析36-37
• 4 放疗后疗效比较37
• 5 放疗对血液的影响37-38
• 5.1 不同时间RILI患者的血液毒性比较37-38
• 5.2 放疗后两组患者的血液毒性比较38
• 6 放疗后各组患者的1年并发症比较38-40
• 讨论40-42
• 参考文献42-47
• 第二部分：建立RILI小鼠模型并检测MMP-9、TIMP-1 表达研究47-73
• 引言47-49
• 材料与方法49-55
• 1 材料49-50
• 1.1 实验动物49
• 1.2 试剂49
• 1.3 主要仪器49-50
• 2 研究方法50-51
• 2.1 建立RILI小鼠模型50
• 2.2 小鼠活动度测量50
• 2.3 取材50-51
• 2.4 因子检测51
• 2.5 病理切片制作与HE染色51
• 2.6 外周血细胞计数51
• 2.7 GSH干预实验51
• 3 实验方法51-54
• 3.1 Elisa检测血清中MMP-9、TIMP-1 含量51-52
• 3.2 组织切片及HE染色52-54
• 4 统计学54-55
• 结果55-65
• 1 RILI小鼠实验模型确定55
• 2 照射后小鼠细胞因子变化情况55-56
• 2.1 照射后MMP-9 表达情况55
• 2.2 照射后TIMP-1 表达情况55-56
• 3 肺组织病理变化56-57
• 4 照射后小鼠一般情况57-61
• 4.1 各组不同时间小鼠活动度情况57-58
• 4.2 各组小鼠不同时间的体重比较58-59
• 4.3 照射后小鼠外周血白细胞变化情况59
• 4.4 照射后小鼠血小板变化情况59-60
• 4.5 照射后小鼠血红蛋白变化情况60-61
• 5 GSH干预RILI小鼠比较61-65
• 5.1 GSH干预照射后小鼠细胞因子变化61
• 5.2 GSH干预RILI小鼠病理变化61-62
• 5.3 GSH防治照射后小鼠一般情况变化62
• 5.4 GSH防治照射后小鼠血象变化62-65
• 讨论65-68
• 参考文献68-73
• 结论73-75
• 致谢75-78
• 综述 放射性肺损伤与细胞因子的研究进展78-92
• 参考文献85-92
• 个人简历92

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：671601