孕妇血清PAPP-A活性氧传递均相发光免疫测定法的初步建立和临床评价

发布时间：2017-10-12 10:51

  本文关键词：孕妇血清PAPP-A活性氧传递均相发光免疫测定法的初步建立和临床评价

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【摘要】：目的:本研究以活性氧传递均相发光免疫分析(LOCI)技术的AlphaScreen平台为基础,研发孕妇血清妊娠相关蛋白A(PAPP-A)的均相免疫检测体系,然后对此体系做方法学和临床评价。方法:本研究的检测体系包括受体微球(PAPP-A多克隆抗体标记)、生物素(PAPP-A单克隆抗体标记)、待测PAPP-A和供体微球,受体微球和生物素化抗体的最适浓度用棋盘滴定的方法加以确定,并进行试剂加样量、反应时间等实验条件的优化。在此基础上,得出拟合方程的标准曲线,用光激化学发光分析仪检测待测临床标本,所得光信号值带入拟合方程计算出PAPP-A浓度,然后对此检测体系进行方法学和临床评价。采用ELISACalc软件进行剂量-反应曲线数学模型及相关统计学分析。结果:本研究建立了孕妇血清PAPP-A活性氧传递均相发光免疫检测体系,并对其进行了实验条件的优化,并对该检测体系进行了方法学和临床评价,灵敏度达到了2.84mU/L;批内和批间精密度分别达到5.91%-7.94%和6.14%-9.69%;回收率在96.7%-100.3%,也符合临床检测的需求;特异性检测中,对血红蛋白的干扰率为8.37%(低值)和6.98%(高值),对总胆红素的干扰率为6.57%(低值)和9.23%(高值),对甘油三酯的干扰率为7.97%(低值)和9.38%(高值),说明该检测体系有着较强抗溶血、脂血和黄疸的能力;我们还对该检测体系是否发生Hook效应进行了考察,在PAPP-A含量达到8000mU/L时,未见Hook效应发生,线性范围为2.8mU/L-8000mU/L;在与时间分辨荧光分析法的相关性分析中,相关性达到了98.9%。结论:本检测体系检测性能良好,灵敏度、准确性、重复性、抗干扰能力等均较好,可用于定量检测孕妇血清PAPP-A,而且与时间分辨荧光分析法比较,步骤简洁、时间大大缩短、成本较低,进一步研发有望推广临床应用。
【关键词】：妊娠相关蛋白A 均相免疫分析 活性氧传递均相发光 供体微球 受体微球
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.6;R714.5
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-18
• 研究现状、成果11-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、孕妇血清PAPP-A活性氧传递均相发光检测体系的建立及条件优化18-33
• 1 材料和方法18-21
• 1.1 实验材料18-19
• 1.1.1 实验器材18
• 1.1.2 重要试剂18-19
• 1.2 实验方法19-21
• 1.2.1 抗体筛选19
• 1.2.2 抗体包被受体微球19-20
• 1.2.3 抗体生物素化20
• 1.2.4 标准品和临床标本20
• 1.2.5 最佳抗体对的确定20
• 1.2.6 反应条件的优化20-21
• 1.2.7 检测体系的建立21
• 2 结果21-32
• 2.1 抗体组合筛选21-23
• 2.2 生物素化抗体及抗体包被受体微球的最适反应浓度23
• 2.3 检测缓冲体系的优化23-25
• 2.4 供体微球的加样量25-26
• 2.5 待测物与抗体包被受体微球加样体积的优化26-28
• 2.6 加样顺序的优化28
• 2.7 反应时间的优化28-31
• 2.8 检测体系的确定31-32
• 3 小结32-33
• 二、孕妇血清PAPP-A活性氧传递均相发光免疫检测体系的方法学及临床评价33-42
• 1.材料与方法33-37
• 1.1 实验材料33-34
• 1.1.1 实验仪器33
• 1.1.2 实验试剂33
• 1.1.3 临床标本、质控品和标准品33-34
• 1.2 实验方法34-37
• 1.2.1 测定方法34
• 1.2.2 方法学评价34-36
• 1.2.3 临床评价36-37
• 2.结果37-42
• 2.1 方法学评价37-40
• 2.1.1 灵敏度37
• 2.1.2 准确性37
• 2.1.3 精密度37-38
• 2.1.4 特异性38
• 2.1.5 稳定性38-39
• 2.1.6 Z因子39
• 2.1.7 相关性分析39
• 2.1.8 孕早期孕妇PAPP-A参考值39-40
• 2.1.9 Hook效应40
• 2.2 临床评价40-42
• 2.2.1 卡方检验40
• 2.2.2 一致性分析40-42
• 三、讨论42-46
• 结论46-47
• 参考文献47-51
• 发表论文和参加科研情况说明51-52
• 附录52-60
• 综述 妊娠相关蛋白A的临床应用及检测进展60-74
• 综述参考文献70-74
• 致谢74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 杨晓达，，常文保，慈云祥;免疫分析法进展[J];化学进展;1995年02期

2 吴国沛,谭卫强,杜娟,苏亮,檀德馨,谢芸钊,蒙文霞;孕妇血清妊娠相关血浆蛋白A筛查诊断高危妊娠的研究[J];中国优生与遗传杂志;2000年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 崔洪艳;妊娠11-13~(+6)周胎儿染色体非整倍体异常产前筛查与诊断策略[D];天津医科大学;2013年

本文编号：1018302