孕鼠脂多糖暴露致子代肾脏组织DNA甲基转移酶表达变化的初步研究

发布时间：2017-10-14 17:13

  本文关键词：孕鼠脂多糖暴露致子代肾脏组织DNA甲基转移酶表达变化的初步研究

  更多相关文章： 孕期刺激 炎症 甲基化 高血压

【摘要】：背景和目的:健康与疾病起源(Developmental Origins of Health and Disease,DOHaD)学说在过去20年得到了极大的发展。大量流行病学调查及动物实验研究发现生命早期不良刺激,尤其是在宫内的不良刺激会引起子代成年后容易出现高血压、肥胖、胰岛素抵抗、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病、哮喘、慢性肾病、甚至肿瘤等成人慢性疾病。中国心血管病报告(2013)显示心血管病死亡占城乡居民死亡原因的首位,高血压是心血管疾病的最主要危险因素之一,高血压在人群中发病率高,但是目前高血压的发病机制还不是很清楚。目前,很多动物实验研究发现孕期不良刺激会引起子代表观遗传修饰模式发生变化,并引起子代产生印记效应,并发生终生性的变化。因此,我们从表观遗传学角度探讨孕期不良刺激引起高血压疾病的发生机制,试图为成年慢性疾病的预防及治疗提供新的思路。在孕期以脂多糖为炎症刺激刺激因子进行刺激发现孕鼠胎盘、羊水中的一些细胞因子(如IL-6、TNF-α)水平升高。最近研究还发现高水平的IL-6可以通过JAK2通路,上调转录因子Fli-1水平,并增加DNMT1(DNA甲基转移酶1)的水平;此外,TNF-α也可以使核转录因子NF-κB的表达上调,刺激DNMT3B(DNA甲基转移酶3B)表达增高导致组蛋白甲基化沉默Notch-1基因。这些研究提示炎症因子可以引起DNMT的表达水平发生变化。基于前期实验并结合最新研究进展,我们提出以下假设:孕期炎症刺激可能通过升高子代炎症因子表达影响DNA甲基转移酶水平改变导致目的DNA表观遗传修饰模式改变,造成了关键基因时空特异性表达异常,从而导致慢性成年高血压病的发生。本实验在已建立的动物模型基础上,进一步检测大鼠肾脏组织中的炎症因子和甲基化转移酶的水平,探讨DNA甲基化是否参与高血压的发生机制。材料和方法:1.实验动物及处理16只通过阴道栓检查的获得准确妊娠时间的SD大鼠,随机分为4组,每组4只。对照组:在sd大鼠孕期第8-14天每天予以腹腔注射无菌生理盐水0.5ml;pdtc组:sd孕鼠在孕期第8-14天每天腹腔注射nf-κb抑制剂pdtc(100mg/kg);lps组:在孕鼠孕期的第8、10、12天分别予以腹腔注射0.79mg/kg脂多糖(lps),在孕期的第9、11、13、14天注射0.5ml生理盐水;lps+pdtc组:在孕鼠孕期的第8、10、12天分别予以腹腔注射0.79mg/kg脂多糖(lps)和pdtc,在孕期的第9、11、13、14天腹腔注射剂量为100mg/kg的pdtc。2.子代大鼠体重及血压的测量子代大鼠出生后,4周断奶分笼,从4周龄到12周龄每2周测量一次体重,每只称3次,取平均值。从6周到12周每2周进行一次大鼠尾动脉无创血压测量,每只测量3次,间隔3分钟以上,取平均值。3.子代大鼠肾脏组织中il-6、tnf-α、fli-1、dnmts的mrna水平的测定采用real-timepcr方法检测子代大鼠肾脏组织的il-6、tnf-α、fli-1、dnmts的mrna表达水平。4.子代大鼠肾脏组织中fli-1、dnmts蛋白质水平测定用westernblot方法检测子代大鼠肾脏组织的il-6、fli-1、dnmts蛋白质水平。结果:1.在子代大鼠周龄4-12周时,每2周检测一次体重,子代大鼠lps组体重高于对照组,在12周龄时lps组明显高于对照组(p0.01),且lps+pdtc组与对照组无明显差异(p0.05)。2.lps组的子代大鼠血压明显高于对照组(p0.01),而用pdtc进行干预后与对照组无明显差异(p0.05),说明pdtc可以逆转lps对血压的作用。3.孕期暴露于lps的子代大鼠肾脏组织中il-6、fli-1、dnmt1、dnmt3b的mrna的表达在实验组较对照组显著升高(p0.05),pdtc干预后可以逆转il-6、fli-1、dnmt1、dnmt3b的变化。4.肾脏组织中的tnf-α水平6周龄时实验组比对照组水平增高,但是差异不显著,而在12周龄时,lps组子代大鼠肾脏组织中tnf-α的水平显著高于对照组。5.肾脏组织中dnmt3a的表达在实验组和对照组中差异不显著。结论:1.孕鼠用脂多糖处理后,出现子代大鼠血压增高、体重增加,成功复制了炎症刺激子代大鼠高血压的模型;2.用脂多糖对孕鼠进行刺激可以引起子代大鼠肾脏组织DNMT1、DNMT3B表达增高,PDTC进行干预可以逆转DNMT1、DNMT3B的表达水平,提示了DNA甲基化可能参与了孕期炎症刺激引起子代成年高血压的发生机制;3.用LPS刺激孕鼠后会引起子代大鼠肾脏组织IL-6、Fli-1的表达增高,提示孕期炎症刺激可能通过改变子代体内炎症因子IL-6水平,上调Fli-1的表达,导致DNMT1水平升高。
【关键词】：孕期刺激 炎症 甲基化 高血压
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.2
【目录】：

• 英文缩写一览表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 1 前言及研究背景11-14
• 2 材料和方法14-26
• 3 结果26-40
• 4 讨论40-43
• 全文小结43-44
• 参考文献44-47
• 文献综述 孕期刺激对子代发育影响的研究进展47-57
• 参考文献51-57
• 硕士在读期间发表的论文57-58
• 致谢58

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本文编号：1032177