重度子痫前期胎盘外泌体影响滋养细胞及内皮细胞功能的初步研究

发布时间：2017-10-17 07:39

  本文关键词：重度子痫前期胎盘外泌体影响滋养细胞及内皮细胞功能的初步研究

  更多相关文章： 外泌体 滋养细胞 血管内皮细胞 子痫前期

【摘要】：[研究目的]子痫前期(Pre-eclampsia,PE)是妊娠期特有的并发症。表现在妊娠20周以后出现高血压、蛋白尿及全身多器官功能损害。胎盘子宫螺旋小动脉重塑不足是PE的重要病理改变,此与绒毛外滋养细胞功能有密切关系；而全身血管痉挛造成的高血压则与血管内皮损伤及功能紊乱相关。近年,Redman提出PE发病的两阶段理论,即第一阶段在子宫胎盘局部,第二阶段全身症状出现。研究PE子宫胎盘局部变化引起全身血管病生理变化的过程成为热点。外泌体是稳定存在于细胞外的一种微型囊泡,可将mRNA、 mRNA、蛋白质等生物活性分子包裹在内,运送到靶细胞从而影响靶细胞生物学功能。近来研究发现,胎盘可分泌外泌体到母体循环,调控母体全身器官的功能改变,以适应妊娠的需求,如若这一过程发生异常,则会导致妊娠疾病的发生。本研究通过分离PE患者和正常孕妇血清中胎盘外泌体,检测其对HTR-8/SVneo绒毛外滋养细胞炎症通路激活、增殖功能,以及对人原代脐静脉内皮细胞凋亡、血管舒缩相关因子eNOS表达的影响,探讨胎盘分泌的外泌体在PE发病中的作用。[研究方法]取储存于-80℃的重度PE病人血清及同期正常孕妇血清各15例,每份样品取200m,通过蔗糖密度梯度离心联合两次PEG6000沉淀分离胎盘外泌体,PBS重悬浮,BCA试剂盒对外泌体进行蛋白定量,Western blot分析各层CD63、CD81等外泌体标志分子及胎盘外泌体特有标记蛋白分子PLAP的表达情况,同时表达CD63、CD81、PLAP的密度层即可认为是胎盘外泌体所在密度层。PKH67染色胎盘外泌体后分别与HTR-8/SVneo细胞和HUVEC细胞共孵育6h,荧光显微镜观察HTR-8/SVneo细胞和HUVEC细胞对外泌体的摄入情况。采用CCK-8试剂检测重度PE患者血清及同期正常孕妇血清分离的胎盘外泌体对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响,通过Western blot和qPCR检测PE胎盘外泌体对HTR-8/SVneo细胞NF-κB p65炎症信号通路关键分子(P-P65、MyD88、IL-6)表达的影响。利用Cell Death Detection ELISAPLUS试剂检测PE胎盘外泌体对HUVEC细胞凋亡情况。运用Western blot方法检测PE胎盘外泌体对HUVEC细胞内皮型一氧化氮合酶eNOS表达的影响。[研究结果]1.蔗糖密度梯度离心后,Western blot发现CD63、CD81、PLAP同时表达于21%-34%密度层,证明血清胎盘外泌体主要存在于1.08～1.11g/mL。2.CCK-8检测HTR-8/SVneo细胞增殖情况,结果显示,与正常对照组相比,重度PE病人血清胎盘外泌体明显抑制HTR-8/SVneo绒毛外滋养细胞增殖(OD450nm值分别为1.09-±0.21和0.86±0.21,P0.05)。Western blot结果显示重度PE病人血清胎盘外泌体抑制了HTR-8/SVneo绒毛外滋养细胞增殖相关分子CCND1的表达,且促进了NF-κB p65炎症信号通路相关分子(P-P65、MyD88)表达,并提高了IL-6 mRNA水平。3. Cell Death Detection ELISAPLUS检测结果表明重度PE病人血清胎盘外泌体促进了HUVEC细胞凋亡(与正常组的相对值分别为1.00±0.04,1.15±0.13, P=0.026); Western blot检测结果显示PE病人血清胎盘外泌体显著抑制eNOS表达。[结论]妊娠妇女血清中存在胎盘分泌的外泌体,而PE病人血清中胎盘外泌体明显抑制HTR-8/SVneo滋养细胞增殖,激活NF-κB p65炎症信号通路,引起妊娠过程中滋养细胞增殖不足；同时促进HUVEC细胞凋亡,抑制其表达eNOS,这可能抑制血管内皮舒张功能,与PE高血压发生有关,因此,PE血清中异常存在的胎盘外泌体是炎症信号持续过度激活,PE全身症状出现并不断加重的重要病理介质。
【关键词】：外泌体 滋养细胞 血管内皮细胞 子痫前期
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.244
【目录】：

• 中文摘要4-6
• English Abstract6-10
• 英文缩略词表10-12
• 前言12-14
• 文献综述14-19
• 第一章 胎盘外泌体的分离与鉴定19-28
• 1.1 前言19-20
• 1.2 研究材料20-21
• 1.3 研究方法21-24
• 1.4 实验结果24-26
• 1.5 实验讨论26-27
• 1.6 小结27-28
• 第二章 PE胎盘外泌体对滋养细胞及血管内皮细胞功能的影响28-42
• 2.1 前言28-29
• 2.2 研究材料29-30
• 2.3 研究方法30-34
• 2.4 实验结果34-38
• 2.5 实验讨论38-41
• 2.6 小结41-42
• 第三章 PE胎盘外泌体miR-155抑制eNOS表达42-52
• 3.1 前言42-43
• 3.2 研究材料43
• 3.3 研究方法43-47
• 3.4 实验结果47-50
• 3.5 实验讨论50-51
• 3.6 小结51-52
• 结论52-53
• 主要成果与展望53-54
• 致谢54-55
• 参考文献55-62
• 作者简介62-64
• 附录：基金资助64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 蒋荣珍;穆卫红;黄亚绢;顾京红;李明;陈汉平;;子痫前期血清对血管内皮细胞凋亡及细胞因子表达的影响[J];上海交通大学学报(医学版);2006年12期

，

本文编号：1047607