Rap1GAP缺失表达对卵巢癌恶性生物行为的影响

发布时间：2017-10-20 14:29

  本文关键词：Rap1GAP缺失表达对卵巢癌恶性生物行为的影响

  更多相关文章： 卵巢癌 Rap1GAP C3G Rap1-GTP Wnt 甲基化

【摘要】：目的：阐明卵巢癌组织／细胞中Rap1GAP差异表达程度及可能机理；探讨Rap1GAP蛋白对卵巢癌细胞恶性生物行为的影响及其可能机制。方法：1.通过GST-Pull down及Western blotting检测不同组织类型卵巢癌组织中Rap1GAP、C3G、Rap1-GTP的蛋白表达水平；2.RT-PCR及Western blotting检测了卵巢癌组织和卵巢癌细胞株中Rap1GAP的表达情况；3.通过慢病毒转染技术干扰及外源转染Rap1GAP的表达,筛选并建立稳定的目的细胞株；4.观察沉默原本呈高表达Rap1GAP的OVCAR3细胞株和外源转染原本呈低表达Rap1GAP的Hey细胞株生物行为的改变及其可能机制：MTT实验和平板克隆实验观察细胞增殖,Transwell实验观察细胞的恶性侵袭能力,免疫荧光观察细胞的形态变化,去甲基化处理及RT-PCR观察Rap1GAP表达的恢复情况,Western blotting检测Rap1GAP可能影响的信号通路相关蛋白表达水平。结果：1.GST-Pull down实验观察到,与正常组织和良性卵巢肿瘤相比,Rap-GTP表达升高的卵巢癌组织中,Rap1GAP和C3G均参与调节Rap酶的活性；2.RT-PCR及免疫印迹观察到,与自身正常组织相比,癌灶中Rap1GAP的表达降低始于转录阶段；3.通过慢病毒转染,成功筛选出低表达Rap1GAP的OVCAR3细胞和高表达Rap1GAP的Hey细胞；4.通过功能学实验观察到,敲低Rap1GAP后,OVCAR3细胞的增殖、侵袭能力均增强,HEY细胞过表达Rap1GAP后细胞增殖、侵袭能力减弱,并且观察到细胞形态改变,即F-actin在胞膜边缘聚集增加板状伪足和片状伪足增加。5.机制的探讨中发现,在高Rap1GAP表达的卵巢癌细胞OVCAR3中敲低RapGAP,会引起Wnt通路中关键蛋白GSK3βser9、β-catenin、c-myc、cyclinDl的表达上升,与此一致的是,在低Rap1GAP表达的细胞HEY中外源强制表达Rap1GAP,上述经典Wnt信号通路相关蛋白表达降低；6.去甲基化处理多个卵巢癌细胞株可以引起Rap1GAPmRNA的表达升高。结论：我们的研究提示,启动子甲基化可能是卵巢癌Rap1GAP缺失表达的原因；Rap1GAP可能通过抑制Rap1-GTP水解而保持酶活性从而促进肿瘤的侵袭,同时可能抑制Wnt通路促进细胞恶性增殖。
【关键词】：卵巢癌 Rap1GAP C3G Rap1-GTP Wnt 甲基化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 1 材料和方法13-23
• 2 结果23-38
• 3 讨论38-42
• 全文总结42-43
• 参考文献43-47
• 文献综述47-59
• 参考文献53-59
• 致谢59-60
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录60

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王燕玉;项双卫;;Rap1GAP与宫颈癌关系的研究进展[J];中国医学创新;2012年14期

2 ;[J];;年期

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 李雪梅;Rap1GAP缺失表达对卵巢癌恶性生物行为的影响[D];重庆医科大学;2015年

2 矫力;胶质细胞源性神经营养因子受体Ret与Rap1GAP相互作用及其功能的研究[D];第二军医大学;2005年

3 孙悦;宫颈癌中Rap1GAP表达下调机制的研究[D];大连医科大学;2013年

，

本文编号：1067656