过表达钙周期蛋白S100A6对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞生物学活性及β-catenin水平的影响

发布时间：2017-10-30 03:21

  本文关键词：过表达钙周期蛋白S100A6对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞生物学活性及β-catenin水平的影响

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【摘要】：目的:探讨钙周期结合蛋白S100A6对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)在位内膜间质细胞增殖、迁移、凋亡的影响,以及对细胞中β-catenin表达水平的影响。方法:体外培养EMs在位子宫内膜间质细胞,将慢病毒载体和表达S100A6的重组慢病毒Lv-S100A6分别处理在位内膜间质细胞分别作为干预组和实验组,设立对照组(空白组),通过CCK-8法检测细胞增殖,Transwell观察细胞迁移,流式细胞仪观察细胞凋亡,Western-blot和RT-PCR检测细胞中β-catenin的蛋白和m RNA表达情况。结果:CCK-8实验结果表明,Lv-S100A6组细胞的增殖活性明显高于干预组(negative group)以及对照组(blank group)(p0.05),Transwell实验表明Lv-S100A6组细胞的迁移数(180±14.2)明显高于干预组(93±10.6)以及对照组(89±18.5)。细胞凋亡实验表明,Lv-S100A6组细胞的凋亡率(2.99±1.12)%明显低于对照组(13.48±1.20)%和干预组(14.40±1.08)%(p0.05)。Westren-blot结果显示,Lv-S100A6组、干扰组和对照组中在位内膜间质细胞中β-catenin的蛋白的IOD值分别为0.668±0.016、0.326±0.008和0.314±0.012(p0.05),RT-PCR结果显示,Lv-S100A6组、干扰组和对照组中在位内膜间质细胞中β-catenin m RNA的IOD值分别为0.837±0.010、0.512±0.011和0.498±0.012(p0.05),而S100A6 m RNA的IOD值分别为0.495±0.015、0.242±0.021和0.231±0.018(p0.05)。结论:通过上调细胞中S100A6的表达,能增加EMs在位子宫内膜间质细胞的增殖能力、促进细胞的迁移并且抑制细胞的凋亡,同时可以上调细胞中β-catenin的表达。
【关键词】：S100A6 子宫内膜异位症 增殖 迁移 β-catenin
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.71
【目录】：

• 摘要3-4
• 英文摘要4-8
• 中英文对照表8-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料11-15
• 2.1 实验细胞11
• 2.2 主要试剂11-12
• 2.3 主要仪器12-13
• 2.4 主要液体的配置13-15
• 第3章 方法15-24
• 3.1 实验分组15
• 3.2 细胞培养15-17
• 3.2.1 细胞复苏15
• 3.2.2 细胞换液15
• 3.2.3 细胞传代15-16
• 3.2.4 细胞冻存16
• 3.2.5 细胞计数16-17
• 3.3 S100A6 转染17-18
• 3.3.1 S100A6 质粒转染17
• 3.3.2 重组慢病毒S100A6 转染17-18
• 3.4 细胞增殖实验18
• 3.5 细胞迁移实验18
• 3.6 细胞凋亡实验18-19
• 3.7 RT-PCR法检测细胞中 β-catenin mRNA及S100A6 的表达19-21
• 3.7.1 总RNA提取19
• 3.7.2 逆转录过程19-21
• 3.7.3 琼脂糖凝胶电泳21
• 3.8 Western-blot检测细胞中 β-catenin蛋白表达水平21-23
• 3.8.1 总蛋白的提取 （使用总蛋白提取试剂盒操作）21-22
• 3.8.2 制胶及电泳22
• 3.8.3 转膜22-23
• 3.8.4 免疫反应及曝光23
• 3.9 统计学处理23-24
• 第4章 结果24-30
• 4.1 荧光显微镜下在位子宫内膜间质细胞转染效果24-25
• 4.2 过表达S100A6 能促进EMs在位子宫内膜间质细胞增殖25
• 4.3 过表达S100A6 能增强EMs在位子宫内膜间质细胞迁移能力25-26
• 4.4 过表达S100A6 能抑制EMs在位子宫内膜间质细胞的凋亡26-27
• 4.5 过表达S100A6 能增强细胞内S100A6 mRNA的表达27-28
• 4.6 过表达S100A6 能增强EMs在位子宫内膜间质细胞内 β-catenin mRNA的表达28-29
• 4.7 过表达S100A6 能上调EMs在位子宫内膜间质细胞中 β-catenin的表达29-30
• 第5章 讨论30-33
• 第6章 结论与展望33-34
• 6.1 结论33
• 6.2 展望33-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-38
• 攻读学位期间的研究成果38-39
• 综述39-46
• 参考文献44-46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1115890