纳秒电脉冲致人卵巢癌细胞及其顺铂耐药株DNA损伤时间效应

发布时间：2017-11-05 02:10

  本文关键词：纳秒电脉冲致人卵巢癌细胞及其顺铂耐药株DNA损伤时间效应

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【摘要】：卵巢癌是女性生殖器常见恶性肿瘤之一,由于早期缺乏典型症状,且筛查手段有限,故诊断十分困难,就诊时大多已发展为晚期,但晚期疗效又不理想。虽然卵巢癌的发病率居妇科恶性肿瘤的第三位,低于宫颈癌和子宫内膜癌,但其死亡率却位于妇科恶性肿瘤的首位。尽管已有多种治疗手段应用于临床,但其5年生存率仍较低。顺铂是临床治疗多种肿瘤重要的化疗试剂,它的主要作用靶点是DNA。放、化疗均通过损伤肿瘤细胞DNA来达到治疗目的,治疗过程中肿瘤细胞将逐渐产生抗性,导致治疗失败。纳秒电脉冲(nanosecond electric pulses, nsEP)是一种很有潜力的治疗方法,它可跨膜影响细胞内结构,能够诱导细胞凋亡、抑制血管生成以及破坏肿瘤微环境等,从而导致肿瘤细胞坏死。nsEP作为一种不需要药物的纯电场治疗,且无热消融,有望成为肿瘤治疗的一种新型手段。目的：本研究旨在通过研究nsEP对人卵巢癌顺铂敏感和耐药细胞株DNA损伤的时间效应,探讨nsEP引起的DNA损伤与细胞死亡之间的相关性。方法：取对数生长期的A2780细胞或者C30细胞制备密度为5×105/ml的单细胞悬液,将细胞置于漩涡混匀器上面混匀后取1ml细胞于24孔板中,每次脉冲处理时每一个24孔板只有一个孔中盛有细胞。然后调整电极间距离为1 cm,电压6 kV(即场强为6kV/cm),脉宽为24 ns的脉冲电场处理60 s。对照组细胞给予假脉冲处理。每个时间点均设有实验组和对照组。1,脉冲处理完毕后,将24孔板中所有的细胞回收到EP管中再次混匀以后用于后续实验。nsEP处理后继续培养细胞于0 h、4 h、8 h、12 h和24 h用CCK-8试剂盒测定细胞活性,并计算细胞死亡率。每个时间点均设置有实验组(nsEP处理后)、对照组(nsEP假处理)和空白对照组(不含细胞,仅加入100μ1实验用培养基)。2,nsEP处理后4 h、8 h、12 h、24 h,采用碱性单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)检测细胞DNA损伤。利用CASP软件测定对照组尾DNA的95th百分位数设置为彗星形成的阈值。并测量实验组75th百分位数尾长(Tail Length, TL),尾矩(Tail Moment, TM,尾部DNA%×尾长)和Olive尾矩(Olive Tail Moment, OTM,尾部DNA%×尾矩长),并计算彗星形成率(%)。结果：1,nsEP处理后0-8 h,C30和A2780细胞的生存率逐渐降低,8-24 h逐渐上升,8 h时细胞生存率最低(P0.05)：4h(86.46% vs 76.29%),8h(78.52% vs 65.96%),12h(84.28 %vs 75.29%),24h(85.11%vs80.87%)。C30细胞的生存率高于A2780细胞(P0.05)。2,从单细胞凝胶电泳结果图可明显看出对照组中A2780和C30细胞均未见彗尾出现。在4h、8h、12h和24h的彗星图像中,A2780细胞的尾长均分别比C30细胞的长。这在某种程度上说明了A2780细胞更易受到nsEP的作用而受到损伤。A2780细胞的死亡率与彗星形成率在4-24 h均高于C30细胞。这又从另一方面证实了A2780的敏感性。统计学分析显示,A2780和C30细胞的死亡率均与彗星形成率呈正相关(r=0.997,P0.05；r=0.998,P0.05)。这说明细胞的死亡与DNA损伤具有相关性。3,A2780和C30细胞的TL、TM、OTM和其75 th百分位数均随时间变化而变化,最大值出现于8 h。这说明细胞的损伤于8h时达到了一个高峰,随后的转折有可能是DNA损伤修复机制的启动所致。A2780的TL,TM和OTM均高于C30(P0.05)。结论：nsEP对顺铂敏感和耐药卵巢癌细胞的DNA损伤具有时间效应；nsEP对人卵巢癌顺铂敏感细胞株和耐药细胞株的DNA损伤效应存在差异,nsEP对顺铂敏感细胞株的损伤高于耐药细胞株；nsEP所致细胞死亡与DNA损伤有关。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31

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本文编号：1142120