胎盘Hofbauer细胞FcγRⅢ介导HBV宫内感染

发布时间：2017-11-07 15:01

  本文关键词：胎盘Hofbauer细胞FcγRⅢ介导HBV宫内感染

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【摘要】：目的：探讨HBV感染孕产妇胎盘组织Hofbauer细胞表面FcyRⅢ的表达水平,探讨绒毛Hofbauer细胞FcyRⅢ表达与宿主体内HBV复制水平的相互关系以及其在介导HBV垂直传播中的作用。 方法：筛选58例HBV感染足月分娩产妇的和60例感染HBV的孕妇流产胎盘绒毛。以Ficoll-Hypaque分离HBV感染产妇的外周血PBMCs和其新生儿的脐血CBMCs, PCR法检测足月分娩HBV感染产妇的外周血和其新生儿脐血HBV-DNA的载量。以胰酶联合EDTA消化液消化新鲜的绒毛组织,以RPMI1640完全培养液悬浮制备细胞悬液,分别采用Ficoll-Hypaque和Percoll密度梯度离心法分离Hofbauer细胞,以台盼蓝染色检测分离纯化的Hofbauer细胞的活度。取分离提纯后的Hofbauer细胞悬液,以RPMI1640完全培养液调整纯化后的细胞浓度为(1-2)×106/mL,以PCR法检测Hofbauer细胞内HBV-DNA载量。取分离纯化的Hofbauer细胞悬液以Trizol进行总RNA的提取,逆转录以随机引物合成cDNA,检测Hofbauer细胞FcyRⅢ的mRNA表达,以lgcDNA/lgGAPDH的比值代表FcyRⅢ mRNA的最终含量,对比分析FcyRⅢ mRNA的表达和HBV-DNA载量间相互关系；HE染色和SP法免疫组织化学染色进一步检测HBV感染孕妇绒毛Hofbauer细胞FcyRⅢ表达与HBV感染水平的关系,分析不同的HBV感染类型孕产妇组织Hofbauer细胞FcyRⅢ表达水平。 结果：HBeAg(+)足月分娩产妇的PBMCs及其新生儿CBMCs内HBV-DNA检出率和HBV病毒载量都高于HBeAg(-)者,差异有统计学意义(P0.05)。其中,PBMCs内高病毒载量组的新生儿血清和CBMCs内HBV-DNA检出率均较高。在早期流产孕妇标本检测发现HBeAg(+)孕妇流产绒毛Hofbauer细胞内HBV-DNA阳性率较高,达46.4%(13/28),且阳性者病毒载量较高,与HBeAg(-)者相比,HBeAg(+)孕妇流产绒毛Hofbauer细胞内HBV-DNA阳性检出率较高,有统计学差异(P0.05)。以PCR法对Hofbauer细胞内HBV-DNA(+)进一步检测发现CD16mRNA较正常者增加,与HBV-DNA(-)者相比,差异有统计学意义(P0.05),且Hofbauer细胞CD16mRNA表达与其HBV-DNA载量有较好的相关性(r=0.65,P0.05)。HBV-DNA(+)组Hofbauer细胞内FcyRⅢ表达明显强于HBV-DNA(-)组,经统计学分析差异有统计学意义(P0.05)。细胞免疫组化染色法结果显示HBV感染孕妇和正常流产绒毛Hofbauer细胞内均见CD16表达,细胞胞膜和在细胞质可见棕色颗粒,其中HBV感染产妇绒毛中的Hofbauer细胞数量增加且CD16着色较正常对照明显增强,同时HBV-DNA(+)者的Hofbauer细胞着色较HBV-DNA(-)者的Hofbauer细胞更明显。HBV感染组胎盘FcyRⅢ mRNA表达较正常组有所升高,差异统计学意义(P0.05),其中宫内感染组的FcyRⅢ mRNA表达较非宫内感染组明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。 结论：Hofbauer细胞为胎盘的巨噬细胞,主要存在于绒毛间质中,Hofbauer细胞在抵抗病原微生物感染胎盘的同时,亦可受HBV侵染。Hofbauer细胞是否能被HBV感染与宿主HBeAg表达和HBV-DNA载量相关。FcyRⅢ是Hofbauer细胞的关键受体,是细胞活化的重要标志。Hofbauer细胞表面FcyRⅡ的表达与宿主乙肝病毒的载量相关。SP法免疫组织化学染色显示FcyRⅢ主要表达在Hofbauer细胞胞膜和胞质中,呈棕色颗粒其表达强弱与宿主体内病毒复制水平和HBV载量正相关。HBV感染Hofbauer细胞后,可激活细胞体内级联信号传导系统,使Hofbauer细胞内FcyRⅢ表达增强,FcyRⅢ与母体循环的HBsAg-抗HBsAg等免疫复合物结合引起细胞免疫或淋巴因子的转录,介导HBV宫内感染。
【学位授予单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.251

【参考文献】

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本文编号：1152892