BV6协同顺铂诱导SKOV3细胞凋亡的作用机制研究

发布时间：2017-11-09 20:14

  本文关键词：BV6协同顺铂诱导SKOV3细胞凋亡的作用机制研究

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【摘要】：目的:由体外实验培养卵巢癌细胞SKOV3,探究smac类似物BV6联合DDP诱导SKOV3细胞凋亡的内在机理。方法:1、MTT比色实验检测各梯度DDP和BV6对SKOV3细胞干预不同时间后的增殖抑制作用并得出两药的IC50;后续分别测验3个适宜浓度的BV6联合1.56ug/ml DDP在不同时间对SKOV3细胞抑制率的差异。2、光镜下观察细胞形态:将实验分为对照、DDP、低BV6、中BV6、高BV6、低BV6+DDP、中BV6+DDP、高BV6+DDP八个组,通过光学显微镜分析以上分组干预SKOV3细胞48h后的生存变化同时留取图片。3、RT-PCR实验:药物干预SKOV3细胞48h后检测核转录因子p65(NF-κBp65)和凋亡蛋白酶3(caspase-3)m RNA的差异。4、Western Blot蛋白印迹实验:药物干预SKOV3细胞48h后检测核转录因子p65和凋亡蛋白酶3在蛋白水平的差异。5、用SPSS19.0分析实验结果。结果:1、MTT实验显示:DDP、BV6两药对SKOV3细胞均具有显著的生长抑制作用,呈剂量-时间依赖的共同特点。DDP、BV6对SKOV3细胞的IC50与干预时间呈负相关。BV6/DDP联合组对SKOV3细胞的抑制率显著高于单药组,差异有意义(P0.01);两药的联合作用也与BV6浓度相关,浓度越大,抑制率越大(P0.01),且表现为时间依赖性(P0.01)。2、倒置显微镜下可见SKOV3细胞经药物干预后,随着BV6浓度增加及两药联合作用,细胞的形状由梭形变为多角形,其密度和体积减小,增殖活性依次降低,最终漂浮于培养液而凋亡。3、RT-PCR实验结果:实验组与对照组相比、两药联合组与BV6、DDP单药组相比,都表现为前者NF-κBp65m RNA含量降低、caspase-3m RNA升高,具有统计学差异(P0.05);BV6浓度越大,NF-κBp65m RNA含量越低, caspase-3m RNA含量越高(P0.05);BV6、DDP单药组间相比,中BV6、高BV6组NF-κBp65m RNA含量均低于DDP组、caspase-3m RNA均高于DDP组(P0.01),而两者在低浓度BV6与DDP组无显著差异(P0.05)。4、Western Blot实验结果:(1)NF-κBp65总蛋白表达变化:实验组与对照组相比、两药联合组与单药组相比,都表现为前者NF-κBp65总蛋白表达降低(P0.05);随BV6剂量增大,NF-κBp65总蛋白表达降低,差异明显(P0.05);BV6单药与DDP组比较,低BV6组NF-κBp65总蛋白含量与DDP组无显著差异(P0.05),中BV6组、高BV6组均低于DDP组(P0.05)。核蛋白实验显示,与对照组相比,DDP组NF-κBp65核蛋白的含量升高,其余六个实验组均下降(P0.05);BV6/DDP组与单药组相比,联合组NF-κBp65核蛋白含量低于DDP单药组(P0.01),但与BV6单药组比较无显著不同(P0.05);BV6浓度越大,NF-κBp65核蛋白含量越低(P0.05)。(2)caspase-3蛋白表达变化:实验组与对照组对比、BV6/DDP联合组与单药组对比,前者caspase-3蛋白含量均升高,差异显著(P0.05);随BV6药物剂量增大,caspase-3蛋白含量升高(P0.05);BV6、DDP单药组间比较,除低BV6组外,中、高BV6组caspase-3蛋白含量都比DDP组高(P0.01);高浓度BV6组、中浓度BV6+DDP组、高浓度BV6+DDP组能检测到cleaved caspase-3的活性,且高浓度BV6+DDP组的活性最大(P0.05)。结论:1、Smac类似物BV6、DDP单药都可以促进SKOV3凋亡,具有剂量-时间依赖性。2、BV6联合DDP以剂量-时间依赖的特点协同促进SKOV3细胞凋亡。3、BV6促进SKOV3凋亡可能与其抑制NF-κBp65核转位激活,促进caspase-3聚集活化引发凋亡级联反应有关。4、DDP可能通过激活NF-κBp65核转位,有诱导化疗耐药的趋势,BV6/DDP联合用药后可逆转这一现象,通过激活caspase-3协同发挥促凋亡作用。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31

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本文编号：1163417