雌激素对雌性大鼠盆底肌间成纤维细胞机械应力效应的影响

发布时间：2017-11-12 07:33

  本文关键词：雌激素对雌性大鼠盆底肌间成纤维细胞机械应力效应的影响

  更多相关文章： 大鼠 盆底 成纤维细胞 机械拉伸力 17-β雌二醇

【摘要】：目的:研究17-β雌二醇(17-βE2)在特定加力强度下对雌性大鼠盆底骨骼肌间成纤维细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor metalloproteinase,TIMP-1)及β-连环蛋白(β-Catenin)的影响。方法:1.研究对象取Wistar雌性大鼠6只均由山西医科大学实验中心供给,喂养2周左右,体重平均120±30g,经各项体格检查均保持健康状况。对雌性大鼠的处理符合中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》[1]。2.成纤维细胞原代培养取Wistar雌性大鼠盆底骨骼肌间组织大约3-5mm,在体外采用II型胶原酶对成纤维细胞原代培养、鉴定及纯化。选取体外稳定传代生长的3-5代成纤维细胞,为后期17-β雌二醇干预提供实验基础。3.成纤维细胞应力对体外培养的成纤维细胞采用Flexercell4000外力加载系统,同时设置特定加力时间为36小时和加力强度为6%。给予拉力后17-βE2继续分别培养24小时,不加力及不加药组为对照组。4.实时荧光定量PCR(RT-PCR)分别提取每组细胞的m RNA,进行RT-PCR测定,记录观察指标中每组的表达结果及电泳照相。结果:1.细胞培养情况体外行骨骼肌间组织原代培养成纤维细胞成功后,将所培养的细胞按照一定比例进行细胞传代。对原代培养出来的细胞进行免疫组化鉴定,结果显示波形蛋白呈阳性反应,角蛋白呈阴性反应为成纤维细胞。2.机械拉伸在拉力时间为36小时和拉力强度为6%的特定条件下,观察所培养的细胞损伤性变化越来越明显。3.RT-PCR法检测结果示:加力强度为6%及加力时间为36小时与对照组比,成纤维细胞中MMP-9m RNA表达量为2.69±0.02,高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。TIMP-1及β-catenin m-RNA的相对表达量分别为0.37±0.01、0.43±0.01,低于对照组,差异有统计学意义。加力强度为6%及时间为36小时在17-βE2干预下,成纤维细胞MMP-9m RNA相对表达量为1.52±0.07,高于对照组,低于加力组,差异有统计学意义(P0.05),TIMP-1及β-catenin m RNA的相对表达量为0.60±0.01、0.63±0.01,低于对照组,高于加力组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:本实验研究发现成纤维细胞受到机械拉伸后,在特定的加力条件下,加力强度为6%及时间为36小时的条件下,成纤维细胞损伤性变化特别明显。荧光实时定量PCR检测拉力组MMP-9 m RNA表达量增加,TIMP-1及β-catenin m RNA表达量下降,使得I型胶原含量减少。而17-βE2干预后,使得拉力组应力表现减弱,从而证明雌激素对盆底功能障碍性疾病具有保护作用。通过对成纤维细胞生物力学的研究,有助于揭示肛提肌组织不同程度的损伤在盆腔器官脱垂的发病机制。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 蒋励;苗娅莉;张立芳;张晓红;王建六;魏丽惠;;盆腔器官脱垂患者阴道壁成纤维细胞受力后变化特征初步研究[J];中国妇产科临床杂志;2010年01期

2 宋岩峰;女性压力性尿失禁的流行病学[J];实用妇产科杂志;2003年02期

3 ;Relationship between resistin level in serum and acute coronary syndrome or stable angina pectoris[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2007年12期

4 曾晓琴;广州市芳村区1995—2002年妇女生殖道健康状况分析[J];中国初级卫生保健;2003年02期

5 朱兰,郎景和,冯瑞娥,陈杰;绝经后压力性尿失禁患者盆底支持结构雌激素受体的研究[J];中华妇产科杂志;2004年10期

，

本文编号：1174958