探索新鲜羊膜促进伤口愈合的最佳保存方法和保存时间

发布时间：2017-11-12 18:38

  本文关键词：探索新鲜羊膜促进伤口愈合的最佳保存方法和保存时间

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【摘要】：目的：本实验随机选取健康的剖宫产妇(年龄25-35岁)3名,产前母体均行血清学检查,排除人类免疫缺陷性病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、巨细胞病毒、疱疹病毒、弓形体、梅毒及其他传染病。无菌条件下分离获取产妇羊膜,灭菌处理后以纯甘油、无水酒精和50%DMEM培养基三种不同的方式保存不同月份,通过羊膜移植实验、HE染色切片及羊膜细胞因子检测研究羊膜在保留生物学功能的同时最佳的保存方法和保存时间。方法：将三种不同保存方式的羊膜不同保存条件下分别保存1-6个月,自羊膜起始保存日,每间隔一个月,取三种保存方式的羊膜对小鼠机械创伤模型进行羊膜移植实验,比较不同保存方式的羊膜保存不同月份对小鼠创面的促进愈合效果；在不同的保存月份取三种保存方式的羊膜做HE染色切片,显微镜下观察羊膜细胞随保存时间的延长,羊膜细胞形态的变化；在不同保存月份取等量的三种保存羊膜,无菌条件下溶解羊膜细胞,通过ELISA法检测羊膜在不同保存月份表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子-p1(TGF-β1)的含量,比较三种羊膜保存不同月份对羊膜细胞因子含量水平的影响。结果：羊膜移植小组的小鼠创伤愈合时间相比未做羊膜移植的小鼠明显较短(P0.05),无水酒精羊膜组的小鼠创伤愈合时间相比纯甘油羊膜组和50%DMEM培养基羊膜组短(P0.05),纯甘油羊膜组的小鼠创伤愈合时间与50%DMEM培养基羊膜组相差较小(P0.05)。三种保存方式的羊膜,保存一个月,细胞形态基本完整,细胞间隙加大；保存两个月,上皮细胞部分细胞核疏松,海绵层结构疏松,纯甘油组和50%DMEM培养基组羊膜海绵层出现空泡样；保存三个月,上皮细胞部分破裂,细胞核脱失,致密层改变不大,纤维母细胞层和海绵层结构疏松,三种保存羊膜海绵层均出现空泡样,纯甘油组羊膜海绵层部分缺失；保存四个月,细胞间隙再次增大,细胞核脱失情况加剧,海绵层均出现缺失,纯甘油组羊膜上皮细胞层结构不规整；保存五个月,上皮细胞少量缺失,细胞部分坏死,核固缩,羊膜细胞层结构变薄,纯甘油组和无水酒精组羊膜纤维母细胞层部分缺失,50%DMEM培养基组羊膜上皮细胞缺失和坏死情况较严重；保存六个月,纯甘油组羊膜上皮细胞连续中断,纤维母细胞层部分缺失,无水酒精组羊膜上皮细胞层结构疏松,纤维母细胞层大面积脱落,50%DMEM培养基组羊膜上皮细胞固缩坏死,基质层出现空炮样变,基底膜模糊。ELISA法检测三种保存羊膜在不同月份细胞因子含量水平,发现四种细胞因子含量随羊膜保存时间延长而减少。表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量均在羊膜保存5月份后下降趋势显著(P0.05),血管内皮生长因子(VEGF)含量在羊膜保存2月份后下降趋势显著(P0.05),结论：羊膜促进创伤愈合的效果、细胞形态的完整性及细胞因子的含量水平均随保存时间的延长而降低；相同保存时间下无水酒精保存羊膜促进创伤愈合的效果及羊膜结构保存的完整性较纯甘油和50%DMEM培养基保存羊膜要好；三种保存羊膜的细胞因子含量变化整体水平上在保存5个月后下降趋势明显。
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714

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本文编号：1177138