MiR-494调控蜕膜MSCs影响子痫前期发病的机制研究

发布时间：2017-11-13 04:23

  本文关键词：MiR-494调控蜕膜MSCs影响子痫前期发病的机制研究

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【摘要】：子痫前期(PE)是妊娠期特发性多器官功能障碍性疾病,也是危害母儿健康的首要原因之一。胎盘血管生成不良是造成PE发病的重要因素。正常妊娠时,母胎界面促血管与抗血管生成因子之间的平衡状态保证了胎盘血管生成与发育过程。但是,PE患者的血管生成因子无论在母胎界面还是血循环中均发生了明显的改变。已报道母胎界面的间充质干细胞(MSCs)可通过分泌多种因子调控血管生成,而母胎界面MSCs功能的改变可能造成母胎界面处血管生成失调,可能是PE发生的病理机制。然而,迄今关于母胎界面处影响MSCs调控血管生成的具体分子机制尚不完全清楚。MicroRNAs(miRs)是一类调控转录后基因表达的短链、非编码RNAs,其影响细胞的增殖、周期、凋亡和功能,在多种疾病中发挥着重要的作用。研究发现,miRs在PE患者的胎盘、血清以及MSCs中的表达也发生了变化。一些研究报道miR-494-3p (miR-494)参与血管生成的调控；我们前期的研究发现PE来源的蜕膜MSCs (dMSCs)中miR-494高表达,推测PE患者母胎界面异常表达的miR-494可能调控dMSCs,进而影响胎盘的血管生成。本文探讨了miR-494对dMSCs细胞特性和功能的影响,以揭示PE患者母胎界面血管生成发生异常的机制。1、PE来源的dMSCs培养上清抑制HTR8/SVneo迁移和HUVEC血管生成,且该dMSCs中miR-494高表达首先,我们培养了正常妊娠孕妇和PE孕妇来源的dMSCs,通过镜下观察和运用流式技术检测,并未发现两者在细胞形态和表面标志上有明显差异；随后,我们又通过trans well迁移实验和Matrigel成血管实验,比较了正常妊娠孕妇和PE孕妇来源的dMSCs功能上的差异,发现PE患者来源的dMSCs的培养上清抑制了HTR8/SVneo细胞的迁移和HUVEC的血管生成。最后通过Q-PCR检测发现PE患者来源的dMSCs中miR-494高表达,而VEGF的表达下调。以上结果提示,PE患者的dMSCs中miR-494高表达,可能与该dMSCs对HTR8/SVneo迁移和HUVEC血管生成的调控作用受抑有关。2、高表达miR-494可抑制dMSCs对血管生成的调控潜能我们随后探讨了miR-494是否影响dMSCs对血管生成的调控潜能。通过脂质体转染技术将miR-494 mimic和miR-494 mimic negative control片段转染至dMSCs中,用Q-PCR和ELISA方法检测了dMSCs中VEGF的表达情况,发现高表达miR-494的dMSCs中VEGF的表达下调：双荧光素酶报告基因检测进一步发现miR-494与VEGF之间具有直接靶向关系；通过trans well迁移实验和Matrigel成血管实验,发现高表达miR-494的dMSCs的培养上清可显著抑制HTR8/SVneo的迁移和HUVEC的血管生成；利用VEGF干扰技术的阳性对照发现,miR-494通过靶向VEGF而影响dMSCs对血管生成的调控潜能。3、高表达miR-494可抑制dMSCs的生长MiR-494不仅有调控血管生成的功能,而且也能调控细胞增殖和周期方面的作用。因此,我们进一步探讨了miR-494对dMSCs生长潜能的影响。首先,我们利用CCK-8试剂检测dMSCs细胞的活性,结果显示高表达miR-494后,dMSCs细胞活力下降；进一步我们通过流式的方法检测了dMSCs增殖、凋亡和周期的情况,发现高表达miR-494可抑制dMSCs的增殖、阻滞dMSCs周期的进展,但不影响dMSCs的凋亡。最后应用Q-PCR和Western Blot检测,发现高表达miR-494抑制了dMSCs中CDK6和CCND1周期相关基因的表达。综上所述,我们发现miR-494具有抑制dMSCs的生长及其对血管生成的调控作用。高表达miR-494的dMSCs的培养上清可抑制HTR8/SVneo的迁移和HUVEC的血管生成；miR-494可通过靶向VEGF的表达降低dMSCs的血管生成调控潜能；miR-494通过抑制CDK6和CCND1等周期相关基因的表达引起dMSCs细胞周期阻滞。结论：母胎界面异常表达miR-494的dMSCs可能参与PE的发病机制。
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.244

【共引文献】

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本文编号：1179096