白藜芦醇抑制子宫内膜癌的体内实验研究

发布时间：2017-11-15 18:07

  本文关键词：白藜芦醇抑制子宫内膜癌的体内实验研究

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【摘要】：背景及目的目前在抗癌研究中,天然生物制剂治疗肿瘤已经成为肿瘤治疗领域的最有前景的途径之一。白藜芦醇作为一种天然生物制剂抑瘤作用已有很多研究,而白藜芦醇在子宫内膜癌中如何起作用还未明确。本实验主要观察白藜芦醇和microRNA-181 a(miR-181a)对子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用。验证该作用是否与体外实验中白藜芦醇和miR-181a对子宫内膜癌细胞作用一致,为临床治疗提供新的思路。方法1、收集2013年至2014年收治南京鼓楼医院妇产科的子宫内膜癌患者的内膜癌组织20例(G1期8例,G2期4例、G3期5例,浆液性乳头状癌3例)及因非恶性原因行子宫全切除术患者(子宫肌瘤)的正常内膜组织13例,Realtime-PCR及Western blot技术检测miR-181a及SIRT1在子宫内膜癌及正常内膜组织中的表达情况。2、应用体外扩增培养的Ishikawa细胞株建立子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。待肿瘤体积达到50mm3(约造模后2周)后,随机将30只荷瘤裸鼠分为6组(每组5只),分别为A组(PBS瘤内注射,10%羟甲基纤维素CMC灌胃)、B组(PBS瘤内注射,白藜芦醇灌胃)、C组(Ad-miR-181a瘤内注射,10%CMC灌胃)、D组(Ad-miR-181a瘤内注射,白藜芦醇灌胃)、E组(空载腺病毒laz-miR-181a瘤内注射,10%CMC灌胃)、F组(laz-miR-181a瘤内注射,白藜芦醇灌胃)。具体剂量：瘤内注射1x PBS(10ul·只-1),Ad-miR-181a(2*10^8·只-1,约10ul·只-1),laz-miR-181a(2*10^8·只-1,约10ul.只-1),灌胃10% CMC(0.1ml·只-1.天-1),白藜芦醇(50.0mg·kg-1天-1),成瘤后,腺病毒瘤内注射每3天一次,共3次,白藜芦醇每天灌胃,1个月后于最后一次治疗后2天处死所有裸鼠。治疗过程中,观察统计移植瘤体积变化,计算抑瘤率；实时定量PCR (real time quantitative Polymerase Chain Reaction, real-time PCR)和Western Blotting方法检测裸鼠移植瘤组织中miR-181a及SIRT1的mRNA和蛋白表达。结果1. miR-181a mRNA在肿瘤组织中表达高于正常内膜组织,且与恶性程度呈正相关,SIRT 1 mRNA及蛋白表达在肿瘤组织中均低于正常内膜组纵。P-STAT 3、AC-STAT3蛋白在肿瘤组织中表达高于正常内膜组织,而STAT3无明显变化。2.成瘤到50mm3大概需要13-16天。白藜芦醇及Ad-miR-181a干预的肿瘤生长明显发生变化。与A组相比,B组、F组肿瘤体积明显缩小(p0.001),差异有统计学意义,C组肿瘤体积明显增大(p0.001),差异有统计学意义,D组体积增大(p=0.023),差异有统计学意义,E组体积稍增大(p=0.252),差异无统计学意义,D组较C组、F组较E组与相比,肿瘤缩小(p0.001),差异有统计学意义,F组较B组,肿瘤体积稍增大(p=0.195),差异无统计学意义。miR-181a mRNA表达水平B组较A组miR-181a mRNA表达水平明显降低(p0.001),差异有统计学意义,F组较A组降低(p=0.001),差异有统计学意义,C组、D组较A组miR-181a mRNA表达水平明显上升(p0.001),差异有统计学意义,E组较A组(p=0.092)差异无统计学意义；D组较C组、F组较E组miR-181a mRNA表达水平明显降低(p=0.001),差异有统计学意义,B组较F组(p=0.076),差异无统计学意义；SIRT 1蛋白相对表达水平上B组、D组、F组较A组蛋白相对表达水平明显升高(p0.001),C组较A组SIRT1蛋白相对表达水平明显下降(p=0.03),差异有统计学意义,E组无明显改变(p=0.926),差异无统计学意义,D组较C组、F组较E组：miR-181a mRNA表达水平明显降低(p0.001),差异有统计学意义,B组较F组(p=0.911),差异无统计学意义。结论本研究表明]miR-181a mRNA在子宫内膜癌组织中高表达,且与恶性程度呈正相关,SIRT 1 mRNA及蛋白在肿瘤组织中低表达。过表达：miR-181a可有效沉默SIRT1的表达,显著促进人子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长,并降低肿瘤组织中SIRT1基因的表达。而白藜芦醇对人子宫内膜癌ishikawa细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,并在一定程度上逆转miR-181a转染组的效果,可明显下调miR-181a的表达,上调SIRT1的mRNA及蛋白表达量。证明在体内实验中白藜芦醇可通过miR-181a/SIRT 1/ STAT 3通路抑制子宫内膜癌的生长。这些结论均提示miR-181a是调节子宫内膜癌发生发展中的一个重要miRNA,并且有望成为新的治疗靶点,为白藜芦醇将来应用于治疗子宫内膜癌提供了一定的基础实验资料。
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33

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本文编号：1190698