宫内缺氧对子代大鼠肝纤维化易感性的影响

发布时间：2017-12-04 08:12

  本文关键词：宫内缺氧对子代大鼠肝纤维化易感性的影响

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【摘要】：目的:1.探讨孕鼠宫内缺氧对胎鼠及子代大鼠肝生长发育的影响;2.研究孕鼠宫内缺氧对成年子代大鼠肝纤维化易感性的影响。方法:将妊娠大鼠从妊娠第4天至20天(gestation day,GD4-20)放入缺氧环境饲养(O2浓度10±0.5%)。实验分为:常氧组,宫内缺氧组。称量两组胎鼠及子代大鼠体重、肝重,计算肝比重;全自动生化仪检测20天龄、1月、3月龄子代大鼠血清总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,Alb)、总胆红素(total bilirubin,BIL-T)和直胆红素(direct bilirubin,BIL-D)、谷丙转氨酶(alanine transarninase,ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,AST)含量。对肝组织行HE染色。将子代5月龄雄性SD大鼠随机分为常氧子代组和缺氧子代组,常氧+CCl4处理组,缺氧+CCl4处理组(常氧和缺氧子代组腹腔注射生理盐水,常氧+CCl4处理组和缺氧+CCl4处理组腹腔注射40%CCl4橄榄油混悬液)。于2、4、6周末随机取四组大鼠称量体重、肝重;肝组织行HE和Masson染色,光镜下观察病理学改变,并按SSS计分系统进行评分。结果:1.缺氧组胎鼠体重、肝重、肝比重明显低于常氧组(P0.05)。2.肝组织HE染色:常氧组胎鼠肝细胞排列不规则,无明显肝小叶结构;缺氧组胎鼠肝血窦更明显。3.缺氧+CCl4处理组与常氧+CCl4处理组成年子代大鼠相比,第2周肝比重减少,第4周和第6周肝比重均显著增加(P0.05)。4.CCl4处理成年子代大鼠肝组织HE染色:常氧+CCl4处理组和缺氧+CCl4处理组肝组织出现不同程度损伤。第2周缺氧+CCl4处理组肝细胞可见大量脂肪空泡,出现脂肪变性;第4周缺氧+CCl4处理组肝组织内结缔组织增生逐渐形成假小叶。5.CCl4处理成年子代大鼠肝组织Masson染色:第4周缺氧+CCl4处理组肝组织出现脂肪空泡样结构,并伴有大量胶原纤维,纤维隔较厚,假小叶明显;常氧+CCl4处理组直到第6周出现上述现象。结论:宫内缺氧显著影响肝生长发育,并增加了成年后肝纤维化易感性。目的:1、观察体外缺氧对HSC-T6生长、增殖、周期和凋亡的影响。2、检测缺氧条件下HSC-T6蛋白表达,进一步揭示缺氧与肝纤维化之间内在联系。方法:将HSC-T6分别在缺氧(1%O2)和常氧(21%O2)体外培养一定时间。随后用细胞计数仪进行细胞计数;收集细胞用冷丙酮固定,碘化丙啶染色后通过流式细胞仪分析细胞周期;TUNEL染色检测凋亡细胞。Western blot检测细胞中HIF-1α、TGF-β1和PDGFR-β表达。结果:细胞培养48、72小时,缺氧组与常氧组相比,细胞数目增多,细胞活力显著增强,细胞增殖指数明显升高,同时细胞凋亡数目增多。缺氧组细胞HIF-1α表达量显著高于常氧组;同时缺氧组细胞TGF-β1和PDGFR-β表达量显著高于常氧组。结论:缺氧诱导HSC-T6周期改变,激活了细胞增殖能力;缺氧条件下,HIF-1α上调促进了TGF-β1的表达和其相关信号通路,导致PDGFR-β表达增强,促使HSC-T6的活化。目的:探讨缺氧对HSC-T6 PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将HSC-T6消化传代加入LY294002后分为四组:N、NL、H、HL。在缺氧(1%O2)和常氧(21%O2)状态体外培养3、6、12、24、48和72小时。Western blot检测缺氧细胞p110β(PI3K亚基)、Akt-1、p-Akt(S473磷酸化位点)表达。结果:与常氧组相比,缺氧组HSC-T6除24小时外,3-72小时各时间点p110β表达显著增强,除12小时外,3-72小时各时间点p-Akt表达显著增强;3-72小时各时间点常氧+LY294002组和缺氧+LY294002组p110β和p-Akt显著降低。结论:缺氧条件下,PDGFR-β表达上调促进p110β和p-Akt表达增强,加入LY294002,p-Akt和p110β表达量显著下降,初步说明缺氧诱导的HSC-T6活化与PI3K/Akt信号通路激活相关。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.5

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本文编号：1250322