重叠PCR法构建PTEN基因3位点的融合重组载体

发布时间：2017-12-04 14:15

  本文关键词：重叠PCR法构建PTEN基因3位点的融合重组载体

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【摘要】：目的构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组p MD19-exon 5-exon 8载体。方法以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重叠PCR技术,将exon 5和exon 8片段进行连接,再将连接产物exon 5-exon 8片段插入p MD19-T质粒,构建成重组p MD19-exon 5-exon 8载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞DH5α进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果 exon 5-exon 8片段经凝胶电泳检测,可在1 253 bp处见一清晰的目的条带,PTEN基因融合重组质粒经菌液PCR及测序结果鉴定,均与预期结果一致。结论应用重叠PCR法将exon 5和exon 8片段进行融合,并成功构建了PTEN基因融合重组表达载体。
【作者单位】： 南华大学药物药理研究所;
【基金】：国家自然科学基金(81102516) 南华大学研究生创新项目(2016XCX36) 湖南省医药卫生科研计划项目(C2016083)
【分类号】：R737.33;R730.43
【正文快照】： 号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因)是继P53后发现的又一抑癌基因,在子宫内膜癌中突变率较高。通过COSMIC癌症体细胞数据库查找及参考文献[1-4]对子宫内膜癌中PTEN基因的突变谱进行分析,发现其突变主要发生在第5外显子(exon5)的C388G、G389T和第8外显子(exon 8)的968del

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本文编号：1251277