SDF-1在猪小肠黏膜下基质代阴道中的表达研究

发布时间：2017-12-06 04:15

  本文关键词：SDF-1在猪小肠黏膜下基质代阴道中的表达研究

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【摘要】：目的:有研究表明,在损伤中,来自损伤器官的细胞高度表达基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)并引起局部SDF-1水平的增高,这会导致CD34+表达的干/祖细胞通过SDF-1浓度梯度的趋化作用在损伤部位募集与停留,并参与到组织损伤修复中。本实验的主要研究目的为探讨SDF-1在猪小肠黏膜下基质代阴道中随时间的变化规律,指导外源性干细胞移植的最佳时机。方法:选取体重在200g-250g雌性SD大鼠,手术切除正常阴道组织,将猪小肠黏膜下基质(Small intestinal submucosa,SIS)植入切除阴道组织后形成的腔穴内,同时放入模具支撑,以防止闭锁。SIS的顶端与宫颈外口相连,底端与阴道外口切缘缝合。在术后1天、3天、5天、7天、14天处死动物,取出重建的阴道组织。检测SDF-1在基因和蛋白水平上的表达变化:1提取各个时间点重建阴道组织和正常阴道组织的总RNA,各取4μl,分别与2μl溴酚蓝混合,在1.5%的琼脂糖凝胶中电泳,当溴酚蓝电泳出一段距离后,移至紫外线透视仪在波长为300nm的光照射下进行观察,检测RNA的完整性。RNA完整性检测合格后再行RT-q PCR,检测SDF-1的在基因水平的表达情况。2提取不同时间点重建阴道组织和正常阴道组织的蛋白质,通过Western blotting方法检测各个时间点的SDF-1在蛋白水平的表达变化。结果:1分别提取正常阴道组织、术后第1天、3天、5天、7天、14天的重建阴道组织总RNA后,RNA的电泳带28s、18.5s、8s清晰,证实提取的RNA完整性良好。2反应完成后将所有的总RNA用全波长紫外/可见光扫描分光光度计进行扩增曲线分析,SDF-1和GAPDH的扩增曲线指数增长期基本平行,提示扩增效率基本一致,结果以GAPDH作为内参进行相对定量分析,按公式X_0=2~(Ct GAPDH-Ct),计算目的基因的相对表达量,结果显示在手术植入SIS支架后,SDF-1的表达呈上升趋势,SDF-1的表达量在术后第5天达到高峰,第7天开始下降。3 Western blotting检测结果显示手术切除大鼠阴道并植入SIS支架后第5天SDF-1的表达量达到峰值,术后第7天开始下降,进一步验证了RT-q PCR的结果。结论:通过手术方法切除大鼠阴道并置入SIS后,损伤部位代阴道组织的SDF-1表达随时间推移呈上升趋势,在术后第5天达到高峰,第7天SDF-1的表达量开始下降,推测SDF-1对干/祖细胞迁移的趋化作用在术后第5天最强,研究结果为干细胞治疗时移植外源性干细胞窗口期的选择提供了依据。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R713

【参考文献】

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本文编号：1257320