孕期MVAD通过RARα、Src和NR1信号通路影响仔鼠学习记忆功能机制的研究
本文关键词：孕期MVAD通过RARα、Src和NR1信号通路影响仔鼠学习记忆功能机制的研究 出处：《重庆医科大学》2015年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：目的探讨从孕期开始的MVAD对仔鼠成年期学习记忆功能影响中,RARα对NR1的影响是否通过调节Src来实现,并探讨RARα、 Src和NR1三者之间的联系。方法 构建孕期VAN和MVAD大鼠模型(VAN组和MVAD组);分离培养两组新生鼠原代海马神经元,并利用细胞免疫荧光染色鉴定；利用real-time RCR和western blot检测孕期MVAD和VAN组新生鼠海马组织及原代海马神经元细胞RA诱导前后RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表达量；利用细胞免疫荧光检测RA诱导处理细胞前后三个指标的荧光表达量；体外利用RARα沉默和过表达以及空载腺病毒转染VAN组和MVAD组神经元细胞检测三个指标的mRNA表达量；Src家族抑制剂PP2诱导处理神经元后,western blot检测三个指标蛋白表达量；利用免疫共沉淀检测RARα与Src以及NR1是否有相互作用；利用钙影像仪检测对照及处理组细胞的钙兴奋性；利用Morris水迷宫实验检测孕期MVAD和VAN组7周龄仔鼠空间学习记忆的能力。结果①成功构建了孕期MVAD和VAN孕鼠模型；②免疫荧光染色显示,分离培养的新生鼠原代海马神经元95%表达神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)；③孕期MVAD新生鼠海马组织以及神经元中RARα、SFKs和NRl的mRNA和蛋白表达量明显低于VAN组(P0.05)；④孕期MVAD组神经元钙兴奋性明显低于VAN组(P0.05);⑤通过水迷宫实验发现孕期MVAD组生后7W仔鼠其学习记忆功能明显低于孕期VAN组仔鼠(P0.01)；⑥体外予1μmol/L的RA处理神经元细胞24h后,RARα、FKs和NR1的mRNA和蛋白表达量明显增加(P0.001),免疫荧光染色发现树突明显增长且树突中RARα表达明显升高,并且RA处理后的神经元细胞钙兴奋性明显升高(P0.01)；⑦体外予神经元RARα沉默(Si-RARa)和过表达(Over-RARα)干预后,Src的mRNA表达变化同RARα一致,有相应的降低和升高,且变化有统计学差异(P0.05),NR1无显著变化；⑧体外给神经元细胞予Src家族激酶抑制剂PP2处理,发现NR1的蛋白表达变化明显降低,RARα蛋白无显著变化；⑨孕期MVAD和VAN组生后2W龄仔鼠的海马组织进行免疫共沉淀发现,RARα与Src.有结合,说明两者有相互作用,而RARα与NR1无相互作用;⑩水迷宫训练后,血清VA浓度和RARα、Src和NR1的mRNA水平不变,行为学实验可以升高海马组织中RARα、Src和NR1的蛋白表达量。结论孕期MVAD能够影响仔鼠的学习记忆功能,其机制可能是通过RA信号通路中的RARα转录和非转录作用调节Src的表达,进而影响NR1以及钙内流,从而影响仔鼠海马突触可塑性以及学习记忆功能。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714
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，本文编号：1332424
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