Sympk基因对小鼠生殖功能的影响及初步机制探索

发布时间：2018-01-17 17:32

  本文关键词：Sympk基因对小鼠生殖功能的影响及初步机制探索　出处：《南京医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 多聚腺苷酸化 poly(A) 条件性敲除 纯合子致死

【摘要】：哺乳动物的配子(精子和卵子)都是由原始生殖细胞发展而来。其中精子发生包括精原细胞的增殖、精母细胞的减数分裂和精子细胞的变形,是一个高度专一的分化过程。生精细胞基因表达的一个重要特征就是通过选择性多聚腺苷酸化产生细胞特异性的mRNAs,而且通常是利用非经典的AAUAAA非依赖性的多聚腺苷酸化信号通路。研究表明,生精细胞似乎比体细胞更青睐选择多聚腺苷酸化,而且大量的生精细胞转录本与体细胞转录本相比具有较短的3'UTR,这说明了在生精细胞中优先利用了更多的近端多聚腺苷酸化位点。在前期实验室蛋白质组学工作中,我们构建了多个与精子发生相关的蛋白表达谱系,其中在四倍体生精细胞谱系中,我们鉴定到了Sympk基因,并投入了更多的关注。文献报道在体细胞的经典多聚腺苷酸化通路中,SYMPK蛋白作为一个脚手架蛋白协调CPSF和CstF的相互作用,但在精子发生过程中,其是否参与生精细胞特异的多聚腺苷酸化通路,以及由此非经典的多聚腺苷酸化通路与体细胞的通路究竟存在哪些差异,是否还有其特异的相互作用的蛋白存在,这些问题都促使我们深入研究Sympk在小鼠精子发生过程中的功能。本研究首先对该基因在小鼠体内不同时期的表达情况进行了定量(Real time PCR)和定位研究(免疫组化和荧光),同时引进了具有两个loxP位点的类似于Sympk基因全敲的杂合子小鼠,在该小鼠保种和繁殖的过程中,我们发现敲除鼠生出的子代小鼠没有纯合子的存在,这不符合孟德尔遗传定理,因此我们猜测小鼠在胚胎时期纯合子致死。进一步我们将此杂合子小鼠与生精细胞特定DDX4-Cre小鼠进行交配构建了生精细胞特异性敲除小鼠(CKO),并进行一系列生殖力测试和表型分析。在成年小鼠中我们确认了其雄性不育的表型,但是在刚出生的CK○小鼠中,我们却能见到精原细胞。随后我们进一步分析表型出现的时间,2周的小鼠睾丸生精小管内已经出现了大量空泡化,而1周小鼠睾丸生精小管虽然没有明显改变,但是生精细胞数量已经开始有所下降,因此,我们将表型发生的时间点初步确定在1w左右的小鼠。目前我们正在取1w的睾丸组织作为标本留作RNA芯片数据的分析。我们希望在芯片结果中可以鉴定出与Sympk基因表达下调导致的相关基因的显著改变,并试图与多聚腺苷酸化机制进行联系,阐明Sympk基因在精子发生特定多聚腺昔酸化通路中的作用。
[Abstract]:In this study , we found that there is no homozygous mutation in spermatogenic cells .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R711.6

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本文编号：1437273