不同冷冻方法对人精子受精能力的影响

发布时间：2018-01-18 02:02

  本文关键词：不同冷冻方法对人精子受精能力的影响　出处：《河北医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：精子冷冻技术可以有效地保存男性生育能力,与辅助生殖技术结合使用为众多不孕夫妇带来了新希望。经过专家学者们多年来不懈的研究和探索,目前有多种冷冻方法可供选择,包括程序化慢速冷冻、液氮蒸汽冷冻以及精子玻璃化冷冻等,各种方法各有优缺点,程序化冷冻效果值得肯定,但仪器价格高昂,操作费时;液氮蒸汽法利用液氮蒸汽产生的温度梯度进行冷冻,因其操作简便、耗时较少得到广泛应用,但冷冻速率不够稳定可能会对精子产生损伤;玻璃化冷冻技术通过超高降温速率减少胞内冰晶形成带来的机械损伤,不使用高浓度的冷冻保护剂,减小了对精子的渗透性损伤,复苏后精子活力、活率、精子核DNA完整率得到提高,但冷冻体积小,常用于严重少弱精子症和睾丸附睾穿刺取精患者微量精子的保存。因此,如何增加玻璃化冷冻的体积,从而将玻璃化冷冻应用于常规精液成为精子冷冻技术的研究热点。目的:使用常规塑料冷冻管作为载体对正常人群精液进行大体积快速冷冻和常规液氮蒸汽冷冻,观察比较两组精液冷冻前后精子活力、存活率、形态、顶体酶含量、精子核DNA完整性等参数的变化。通过与常规冷冻技术进行比较,探讨分析大体积精液快速冷冻对精子受精能力的影响,以及该技术在临床应用的可行性。方法:精液标本取自2016年9月~2017年1月期间就诊于河北医科大学第一医院生殖医学科的35位患者,患者无梅毒、艾滋、乙肝等传染疾病,在征得患者同意后进行实验。患者年龄27~38岁,禁欲时间控制在2~7天,通过手淫法收集精液于无菌取精杯中,待精液液化后,根据《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》(第五版)对样本进行精液常规分析和形态学检查。纳入标准:液化时间≤1h,精液量≥1.5ml,精子浓度≥40×106/ml,活动率≥40%。将符合标准的精液样本进行密度梯度离心处理,处理后精子悬液平均分为3组:A组,新鲜精液组;B组,采用常规液氮蒸汽法,使用自制蛋黄-甘油-柠檬酸钠精子冷冻液冷冻;C组,采用大体积快速冷冻法,使用蔗糖溶液冷冻,与精液混合后蔗糖终浓度为0.25M。B、C两组中精液与保护剂比例为1:1,逐滴向精液中加入冷冻保护剂,边加入边摇晃。精液标本冷冻储存1周后,从液氮中取出,立即放入36℃水浴箱内解冻复温10分钟,加入1ml洗精液(36℃、6%CO2平衡过夜),200g离心10分钟,弃上清,加入0.5ml洗精液重悬精子。对各组精液活力、存活率、形态、顶体酶含量、精子核DNA完整性、处理后前向运动精子总数(Post-wash total mobile sperm count,PTMC)进行检测。结果:1冷冻后前向运动精子百分比、存活率、精子DNA完整性、顶体酶含量均低于新鲜精液,畸形率则高于新鲜组,差异均具有统计学意义,P0.05。2 C组前向运动精子百分比、存活率、处理后前向运动精子总数稍高于B组,但差异无统计学意义,P均0.05。3 B组精子畸形率高于C组,差异具有统计学意义,P0.05。4 C组精子DNA完整性稍高于B组,但差异无统计学意义,P0.05。5 C组精子顶体酶活性高于B组,差异具有统计学意义,P0.05。结论:以常规塑料冷冻管为载体,蔗糖溶液作为冷冻保护剂,对密度梯度离心处理后精液进行大体积快速玻璃化冷冻,可以取得与常规冷冻法相同的效果,并没有对精子受精能力产生过多额外的影响,复苏后前向运动精子总数可以满足人工授精要求。且这种冷冻方法操作更加简便,无需制备特殊的冷冻载体,耗时更少,价格低廉。
[Abstract]:This paper deals with the changes of sperm motility , survival , morphology , acrosomal enzyme content , sperm nuclear DNA integrity and so on . The results show that the freezing rate of semen is less than 1h , the sperm concentration is 鈮，

本文编号：1438925