MIR-370通过靶向ENG调节子宫内膜样卵巢癌细胞增殖和对cDDP敏感性机制的研究

发布时间：2018-01-24 06:14

本文关键词： miR-370 卵巢癌化疗剂cDDP ENG　出处：《苏州大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：卵巢癌作为致命的妇科恶性肿瘤,造成每年在全世界范围内大约12.5万人死亡,近年来,卵巢癌的起始和进展包括在卵巢癌细胞中异常或失调的基因的分子机制研究正在深入进行。越来越多证据表明微RNA (miRNAs)与卵巢癌的恶性增殖程度相关,本论文发现miR-370在子宫内膜样卵巢癌细胞中失调,从其宫内作用和其作用靶基因预测验证两个方面对其作用机制进行进一步的探究,进一步提供新的针对这种恶性肿瘤治疗的策略的线索。方法：本论文首先利用qRT-PCR和Northern Blotting实验检测子宫内膜样卵巢癌组织和细胞中的miR-370的异常表达,然后进行功能试验检测miR-370对子宫内膜样卵巢癌的影响,利用细胞克隆形成实验和MTT实验检测miR-370对子宫内膜样卵巢癌细胞系IGROV1和TOV112D增殖能力的影响,利用Transwell实验检测miR-370对两株子宫内膜样卵巢癌细胞系IGROV1和TOV112D迁移能力的影响,利用流氏细胞仪检测miR-370对子宫内膜样卵巢癌细胞的细胞周期的影响,又利用Annexin V/PI双染色法检测miR-370对子宫内膜样卵巢癌细胞的细胞凋亡的影响。接下来本论文利用生物信息学软件TargetScan和miRanda对miR-370作用的功能靶基因进行预测,预测到ENG基因是miR-370的靶标,接着首先本论文构建含有ENG基因3'UTR-wt的质粒,又利用双荧光素报告基因对miR-370作用的直接靶基因进行验证。又进一步采用Western Blotting和免疫组织化学的方法检测miR-370与ENG蛋白表达量之间的关系,同时进一步验证miR-370作用靶基因的方式及负相关性,文献表明ENG蛋白与药物的耐药性相关,计算miR-370对子宫内膜样卵巢癌细胞的IC50值,观察miR-370对药物耐药性的影响。最后又进行细胞水平的营救实验证实miR-370调节子宫内膜样卵巢癌细胞的是通过靶向作用ENG基因实现的,本论文又构建了稳定表达miR-370的IGROV1/miR-370细胞株,进行动物异体肿瘤移植模型,在体内水平同时证实了miR-370可以抑制子宫内膜样卵巢癌细胞的增殖,以及miR-370对化疗药物cDDP的敏感性的影响。结果：首先,与正常卵巢上皮细胞相比,miR-370在子宫内膜样卵巢癌组织或细胞系中表达下调,表明miR-370可能在恶性肿瘤中具有潜在的肿瘤抑制基因的作用。功能实验表明miR-370在子宫内膜样卵巢癌细胞系IGROV1和TOV112D中可以抑制细胞的增殖和细胞克隆形成,同时也能促进细胞的凋亡。第二,MIR-370和ENG在子宫内膜样卵巢癌细胞系中表达呈负相关关系,miR-370可以直接靶向降低ENG蛋白的表达,,过度表达miR-370的子宫内膜样卵巢癌细胞可使这些细胞对化疗药物顺铂更加敏感,进一步突出了miR-370的潜在的抗肿瘤作用。然而,当细胞经另一种化疗剂紫杉醇处理,miR-370并不影响其对子宫内膜样卵巢癌细胞的敏感性。第三,细胞水平的营救实验表明miR-370对子宫内膜样卵巢癌细胞的增殖抑制和克隆形成能力的影响是通过影响ENG蛋白的表达而实现的。接下来的在体内动物异体肿瘤移植模型动物实验结果表明,由过表达miR-370的卵巢癌细胞IGROV1成长起来的异体移植的肿瘤与对照组的肿瘤相比有一个更低的增长率。这些有趣的结果引起了本论文去寻找鉴定miR-370的功能靶基因以及对miR-370和它的靶基因在上皮性卵巢癌的调控机制的研究。结论：总的来说,本论文揭示了子宫内膜样卵巢癌细胞中的一个新的调控途径：miR-370在子宫内膜样卵巢癌细胞中的低表达水平,同时可以提高其直接靶基因ENG的表达。ENG的过表达会增强子宫内膜样卵巢癌细胞的恶性增殖程度,包括高水平增殖能力、低水平细胞凋亡或细胞死亡能力、并增强顺铂的耐药性。这方面的研究可能会揭示miRNA调节卵巢癌的机制,也可能有助于开发新的治疗策略来克服这种恶性肿瘤。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of miR - 370 on the proliferation of ovarian carcinoma cell line IGROV1 and TOV112D in ovarian cancer cells . At the same time , the expression of direct target gene ENG can be improved . The overexpression of ENG can enhance the malignant proliferation degree of endometrial ovarian cancer cells , including high - level proliferative ability , low - level cell apoptosis or cell death capacity , and enhance cisplatin resistance . The research in this area may reveal the mechanism of miRNA regulation of ovarian cancer , and may also help to develop new treatment strategies to overcome this malignant tumor .

【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31

【参考文献】