Matriptase和HAI-1与子宫内膜癌细胞侵袭迁移及顺铂疗效判断的相关性研究

发布时间：2018-01-27 14:56

本文关键词： Matirptase HAI-1 子宫内膜癌侵袭迁移凋亡　出处：《福建医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:检测Matriptase和HAI-1基因在三株子宫内膜癌细胞株中的表达情况,探讨Matriptase和HAI-1表达水平与子宫内膜癌细胞株侵袭迁移能力及细胞凋亡情况的相关性。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株,采用Real-time q PCR和Western blot技术检测HEC-1A、HEC-1B和RL952三株子宫子宫内膜癌细胞中Matriptase、HAI-1 m RNA和蛋白表达水平;构建Matriptase基因Si RNA慢病毒载体,采用RNA干扰技术,对Matriptase高表达的HEC-1A和RL952细胞进行瞬时转染,从而达到抑制Matriptase基因表达水平的目的,并应用细胞划痕实验及穿膜小室实验,观察干扰前后癌细胞体外侵袭及迁移能力的改变。采用Real-time q PCR及Western blot技术,检测不同浓度顺铂作用下Matriptase和HAI-1表达水平的改变;并采用细胞划痕实验及穿膜小室实验测定其侵袭迁移能力的改变,流式细胞仪监测顺铂对肿瘤细胞增殖的影响。结果:1.Matriptase m RNA在HEC-1A、HEC-1B和RL952细胞的相对表达量分别为(0.2123±0.021)、(6.95E-4±1.2E-4)和(0.1778±0.013),HAI-1m RNA在三株细胞中的相对表达量分别为(0.2827±0.049)、(0.0263±0.0043)和(0.2420±0.032);Matriptase和HAI-1蛋白在HEC-1A和RL952中均呈阳性表达,但二者在HEC-1B中均为阴性表达或低于可测水准,与m RNA水平相吻合。2.采用Matriptase基因Si RNA慢病毒载体(Ma-Si RNA-89873)建立Matriptase低表达组(Knock down,KD),以加入正常培养基和阴性慢病毒载体NO53分别为空白对照组(Control,CON)和阴性对照组(Negative control,NC)。KD组Matriptase m RNA表达水平显著下调(HEC-1A:0.2157±0.0124 vs0.0358±0.0111;RL952:0.1849±0.0053 vs 0.0341±0.0017),抑制率分别达到83.4%和81.5%。KD组HAI-1 m RNA表达较CON组均有略微上调(HEC-1A:0.3142±0.0277 vs 0.2900±0.0292;RL952:0.2829±0.0021 vs0.2611±0.0192),但差异无统计学意义(P0.05)。Matriptase和HAI-1蛋白水平改变情况与m RNA水平相一致。3.细胞划痕实验结果显示,HEC-1A CON、KD和NC组迁移距离分别为(206.67±28.38)μm、(79.2±6.82)μm和(197.96±16.83)μm;RL952 CON CON、KD89873和NC组迁移距离分别为(184.57±21.97)μm、(76.8±5.48)μm和(175.34±14.73)μm;P(CON vs KD89873)0.001,P(CON vs NC)0.05。Person相关性分析显示,Matriptase m RNA表达水平与迁移距离呈正相关(r HEC-1A=0.97,r RL952=0.982)。4.肿瘤细胞侵袭实验结果显示,与CON组相比,KD组穿膜细胞数显著减少(HEC-1A:139.25±12.3112 vs 48.6±4.8496;RL952:150±7.0710 vs 53.3±5.6376),差异有统计学意义(P0.05),NC组穿膜细胞数为(HEC-1A:132±8.3120;RL952:145±6.0711),差异无统计学意义(P0.05)。Person相关性分析显示,Matriptase m RNA表达水平与穿膜细胞数亦呈正相关(r HEC-1A=0.975,r RL952=0.994)。5.Real-time q PCR结果显示,不同浓度顺铂处理后Matriptase m RNA表达水平均表现为低浓度组表达水平增高(P0.05),高浓度组表达水平降低(P0.05);HEC-1A和RL952细胞实验组中HAI-1 m RNA表达水平呈现先上升后下降的趋势;HEC-1B细胞实验组中HAI-1 m RNA表达水平呈下降趋势。各实验组Matriptase和HAI-1蛋白表达水平的改变与m RNA相吻合。6.细胞划痕实验结果显示,三株子宫内膜癌细胞不同浓度组改变趋势相一致,即低浓度组子宫内膜癌细胞迁移距离较空白株明显增宽(P0.05),高浓度迁移距离显著缩短(P0.05)。7.肿瘤细胞侵袭实验结果显示,三株子宫内膜癌细胞不同浓度组改变趋势相一致,即低浓度组子宫内膜癌细胞穿膜细胞数较空白株增多(P0.05),中浓度和高浓度组穿膜细胞数显著减少(P0.05)。8.流式细胞仪监测结果显示,HEC-1A细胞浓度组(0、2、10、50 mg/L DDP)细胞存活率分别为84.4%、82.8%、75.0%和41.4%;HEC-1B细胞浓度组(0、2、10、50 mg/L DDP)细胞存活率分别为76.9%、73.5%、65.6%和31.8%;RL952细胞浓度组(0、1、2、5 mg/L DDP)细胞存活率分别为89.4%、86.3%、65.8%和31.1%;单因素方差分析,三组实验组组内差异均有统计学意义(FHEC-1A=34.548,PHEC-1A0.001;FHEC-1B=64.141,PHEC-1B0.001;FRL952=115.043,P RL9520.001),两两方差分析:PHEC-1A(0 mg/L vs 2 mg/L)=0.418,PHEC-1B(0 mg/L vs 2 mg/L)=0.412,P RL952(0 mg/L vs 1 mg/L)=0.418,余P值均小于0.05。结论:1.应用RNAi技术,特异性下调Matriptase基因表达水平,子宫内膜癌细胞的侵袭迁移能力明显受限,可见Matriptase表达水平与子宫内膜癌细胞侵袭迁移能力密切相关。2.Matriptase和HAI-1表达水平与子宫内膜癌细胞的侵袭迁移能力密切相关,且此二者的表达水平与顺铂所致的肿瘤细胞凋亡比例相关,可有望成为顺铂疗效评估的指标。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of Matriptase and HAI - 1 gene in three endometrial carcinoma cells , and to investigate the relationship between the expression of Matrixpression and HAI - 1 in human endometrial carcinoma cells . Compared with CON group , there was a slight increase in the level of mRNA expression in the KD group ( 184.57 卤 21.97 ) 渭m , ( 76.8 卤 6.82 ) 渭m and ( 175.34 卤 14.73 ) 渭m ; P ( CON vs KD89873 ) 0.001 , P ( CON vs NC ) 0.05 . Person correlation analysis showed that there was significant difference in the expression level of the mRNA in the KD group compared with CON group ( P < 0.05 ) . The results showed that the survival rates of the cells in different concentration groups were 84.4 % , 82.8 % , 65.6 % and 41.4 % , respectively , and the survival rates of the cells of HEC - 1B were 89.4 % , 82.8 % , 65.6 % and 41.4 % , respectively . Conclusion : 1 . The expression level of Matriptase and HAI - 1 is closely related to the invasion and migration ability of endometrial carcinoma cells .

【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33

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