不明原因复发性流产患者的配偶在体外获能和顶体反应过程中精子DNA损伤的研究

发布时间：2018-01-30 13:17

  本文关键词： 精子DNA损伤 SCSA 获能 顶体反应 氧化应激 不明原因复发性流产　出处：《大连医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：探究不明原因复发性流产女性配偶的精子在体外获能和顶体反应过程中与精子DNA损伤之间的相关性，以及精子DNA损伤的可能机制。 方法:分别对不明原因复发性流产组（n=25）及正常生育组（n=25）的精子，经培养液和钙离子载体A23187（Calciumionophore A23187，Sigma，USA）取0.5h,1h,2h,4h在体外诱导获能和顶体反应处理后，用考马斯亮蓝染液检测诱导不同时间点的顶体反应率（AR）以及用流式细胞仪检测诱导不同时间点的DFI和ROS。整个实验过程中，活性氧（reactive oxygen species,ROS）经双氢罗丹明123（DHR）孵育不同时间点0.5h,1h,2h,4h诱导获能和顶体反应后的精子，经流式细胞仪检测后，用相对光单位（relative light unit,RLU）表示。临床使用的“金标准”精子染色质结构分析（sperm chromatin structure assay,SCSA）检测精子DNA损伤，以及DNA断裂指数（DNA fragmentation index,DFI）表示。 结果：首先，在未经诱导获能和顶体反应前，RSA组的DFI高于正常生育组的DFI，分别是（19.3±4.56)%v.s.(12.2±2.87)%, P0.05，差异有统计学意义。然后，我们检测在37℃分别孵育0.5h,1h,2h,4h后两组的DFI值，差异没有统计学意义。接下来,我们检测诱导获能和顶体反应发生的时间分别是0.5h,1h,2h,4h后RSA组和正常生育组的DFI,发现两组的DFI都有增加，但在0.5h,1h,2h时,两组分别增加的DFI差异无统计学意义，到4h时，我们发现RSA组增加的DFI率高于正常生育组增加的DFI率，分别是（60.02±6.7）%v.s.（49.08±8.6）%，差异有统计学意义。最后，我们检测RSA组和正常生育组经双氢罗丹明123（DHR）在37℃孵育不同的时间点0.5h,1h,2h,4h后上流式细胞仪检测其对应时间点的ROS，发现两组的差异无统计学意义。同时，我们检测两组经双氢罗丹明123（DHR）诱导获能和顶体反应发生不同的时间点0.5h,1h,2h,4h后上流式细胞仪检测其对应时间点的ROS，，呈现和两组检测DFI时同样的变化趋势，随着诱导获能和顶体反应时间的增加，两组的ROS都有增加，但在0.5h,1h,2h时，两组增加的ROS差异无统计学意义，到4h时，RSA组的ROS水平高于正常生育组的ROS水平，分别是36.4±3.1v.s.27.3±2.8，差异有统计学意义。 结论：1.男性精子DNA损伤与不明原因复发性流产有一定的相关性，提示精子DNA损伤或许是不明原因性复发性流产的男性因素之一。2.不明原因复发性流产患者配偶的精子在获能和顶体反应的过程中产生更多的精子DNA损伤，并且这种损伤会随着体外获能和顶体反应的时间延长而逐渐增加，诱导时间到4h时可观察到显著的增加。3.其发生机制可能是在获能和顶体反应的过程中，体内高活性分子ROS产生过多，氧化物的清除速率没有产生氧化物的速度快，使得氧化系统和抗氧化系统的平衡被打破，导致精子完整性受到损伤，精子的染色体DNA断裂。
[Abstract]:Aim: to investigate the relationship between sperm DNA damage and sperm capacitation and acrosome reaction in female spouses with recurrent abortion and the possible mechanism of sperm DNA damage. Methods: the spermatozoa of the patients with recurrent abortion of unknown cause (n = 25) and normal fertility group (n = 25) were studied. The culture medium and calcium carrier A231877 Calciumophore A23187 Sigmaa USA were used to extract 0.5 h for 1 h and 2 h for 2 h. 4 h after induction of capacitation and acrosome reaction in vitro. The acrosome reaction rate at different time points was detected by Coomassie brilliant blue dye and the DFI and ROSs at different time points were detected by flow cytometry. Reactive oxygen (Ros) was incubated with Rhodamine 123DHRs for 1 h and 2 h at different time points. Spermatozoa induced by capacitation and acrosome reaction for 4 h were detected by flow cytometry, then relative light unit was used as relative unit of light. "Gold Standard" sperm chromatin structure analysis of Sperm chromatin structure assay for clinical use, RLU said. The DNA damage of sperm and the DNA breakage index (DNA fragmentation index DFI) were detected by SSA. Results: first, the DFI of DFI group was higher than that of normal fertility group before induced capacitation and acrosome reaction. The difference was statistically significant (P 0.05). Then we measured the incubation time at 37 鈩

本文编号：1476327