肿瘤相关巨噬细胞与卵巢癌肿瘤异质性的相互作用

发布时间：2018-02-12 08:31

  本文关键词： 肿瘤相关巨噬细胞 exosome 卵巢癌 肿瘤异质性　出处：《北京协和医学院》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景及目的：晚期卵巢癌是致死率较高的妇科恶性肿瘤,虽然各种诊断和治疗方法在不断进步,但其预后并没有明显的改善,5年生存率仅40%左右.随着国内外研究的不断深入,肿瘤异质性的研究成为卵巢癌研究的热点,它是指肿瘤在生长过程中,经过多次分裂增殖,其子细胞呈现出分子生物学或基因方面的改变,肿瘤从单克隆状态逐渐转变成多克隆状态。学者们发现卵巢癌细胞与其肿瘤微环境的相互作用对于卵巢癌的进展、免疫抑制、转移以及复发发挥调控作用.对于卵巢癌肿瘤异质性的形成具有重要的影响。肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)是肿瘤微环境的重要组分,发挥免疫刺激或免疫抑制的作用,可能影响卵巢癌的进展过程。另一方面,卵巢癌细胞能够分泌exosome,后者携带大量的生物活性物质,如蛋白质、mRNA、 miRNA等,对肿瘤微环境发生影响,从而与卵巢癌的生长、侵袭、转移相关.因此,我们拟通过进行细胞系实验及卵巢癌组织免疫组化染色分析,来初步探索肿瘤相关巨噬细胞与卵巢癌肿瘤异质性的相互作用,希望为卵巢癌的诊治寻找新的靶点。薄型子宫内膜是指在卵泡发育成熟时子宫内膜厚度过薄,可能由宫腔手术及各种炎性疾病引起,对女性的生育能力造成不利影响。外源性雌激素是治疗薄型子宫内膜的常用方法。研究方法：1.使用差速离心法,分离并纯化5株卵巢癌细胞(ES2、SKOV3、A2780,A2780-L, A2780-H)体外培养上清液中的exosome;使用western blotting对提取的exosome特异标记物进行检测,使用透射电镜对exosome的形态进行观察及鉴定；2.体外诱导单核细胞系(THP-1)的细胞分化为巨噬细胞,并向培养液中加入卵巢癌细胞系来源的exosome,采用激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞对exosome的内吞作用；3.将卵巢癌细胞系来源的exosome加入巨噬细胞培养液中进行诱导,采用流式细胞术检测并比较诱导前后巨噬细胞的表型变化；诱导前后的巨噬细胞分别与卵巢癌细胞进行共培养,观察巨噬细胞对卵巢癌细胞生物学行为的影响；4.对晚期卵巢癌患者卵巢癌原发灶、腹腔播散灶及复发卵巢癌病灶的组织芯片进行免疫组化染色,分析巨噬细胞数量及表型分布情况与治疗、预后的关系。5.对经过雌激素治疗的薄型子宫内膜患者的临床资料进行收集,分析治疗效果的相关因素及治疗后的辅助生育结局。研究结果：1.不同组织学类型及不同侵袭性的卵巢癌细胞系均能够分泌具有典型脂质双层膜结构的exosome,并且不同卵巢癌细胞系来源的exosome均表达exosome的特异标记物TSG101和Alix;2.5株卵巢癌细胞来源的exosome均能够被巨噬细胞内吞；3.5株卵巢癌细胞系来源的exosome均能够使巨噬细胞表达M2型巨噬细胞标记分子CD163的水平增加,诱导后的巨噬细胞能够增加卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P0.05),降低ES2细胞对化疗药物的敏感性(P0.05)；4.在卵巢癌组织中,TAMs,特别是M2型巨噬细胞的密度与卵巢癌的病理分期、分化程度有关(P0.05),并且降低肿瘤对于化疗药物的敏感性(P0.05)；在卵巢癌的原发灶中,M2的密度与患者的总体生存时间和无进展生存时间有关(P0.05)。5.经过雌激素治疗后,92.1%的薄型子宫内膜患者内膜厚度能够达到8cm。治疗效果与治疗前内膜厚度和治疗时间有关(P0.05)。治疗成功的患者,在新鲜胚胎或冷冻-复苏胚胎移植周期中的妊娠率与移植胚胎的质量有关(P0.05)。结论：卵巢癌细胞分泌的exosome通过改变TAMs的极化表型,能够对肿瘤微环境产生影响,进而使肿瘤细胞自身的生物学行为发生改变,促进肿瘤生长、进展、耐药。M2型巨噬细胞在卵巢癌组织中的密度与卵巢癌的期别、分化程度及化疗敏感性有关,并且M2的密度可能成为能够预测患者预后的指标。雌激素治疗薄型子宫内膜的效果与治疗前子宫内膜的厚度及治疗时间长短有关。治疗成功后患者的辅助生育结局与移植胚胎的质量有关。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of tumor - associated macrophages ( TAMs ) on the development of ovarian cancer , and to explore the effect of tumor - associated macrophages on the growth , invasion and metastasis of ovarian cancer . The results showed that exosome of ovarian cancer cell line can secrete exosome with typical lipid bilayer membrane structure .

【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31

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本文编号：1505209