神经病靶酯酶在子痫前期疾病发生中的作用及其机制的研究
发布时间:2018-02-13 22:18
本文关键词: NTE 子痫前期 滋养层细胞 迁移 侵润 出处:《南昌大学》2014年硕士论文 论文类型:学位论文
【摘要】:目的: 滋养层细胞侵入异常是子痫前期发病的重要环节,其病因未明。近年,研究显示神经病靶酯酶(neuropathy target esterase,NTE)与胎盘的发育密切相关,其代谢调节的磷脂酰胆碱,注射至妊娠小鼠体内可诱导出子痫前期的模型,且与滋养层细胞侵润密切相关,故推测NTE可能参与子痫前期疾病的发生。本研究拟探讨NTE在子痫前期表达变化及其对胎盘滋养层细胞迁移及侵润的影响和作用机制。 方法: (1)通过实时定量PCR方法和免疫组化技术,检测NTE mRNA和蛋白在正常妊娠和子痫前期胎盘组织表达变化; (2)通过转染pEGFP-N3-NTE和pGenesil-1-shNTE质粒,在人HTR-8/SV-neo滋养层细胞的产生NTE过表达或抑制; (3)通过划痕实验和Transwell方法,观察NTE对HTR-8/SVneo滋养层细胞迁移和侵润的影响;通过MTS实验,观察NTE过表达或抑制后对HTR-8/SVneo滋养层细胞增殖的影响; (4)通过明胶酶谱和ELISA方法检测细胞上清液MMP-2,9和TIMP-1,2的变化; (5)通过Western blot方法,观察NTE对HTR-8/SVneo滋养层细胞ERK-1/2和AKT信号通路的影响. 结果: (1)通过实时定量PCR检测显示,相对于正常妊娠的胎盘组织,在子痫前期胎盘组织中,NTE mRNA表达水平明显下降(p0.01)。 (2)通过免疫组织化学检测显示,正常妊娠胎盘和子痫前期胎盘组织中,NTE蛋白表达于胎盘组织的细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞中。相对于正常妊娠的胎盘组织,在子痫前期胎盘组织中,NTE蛋白的表达水平明显下降。 (3)通过实时定量PCR和Western blot方法检测显示,相对于未转染Blan-k组,pGenesil-1组和Control shRNA组NTE mRNA和蛋白表达均无明显变化(p0.05)。相对于Control shRNA组,,NTE shRNA组,NTE mRNA(p0.05)和蛋白(p0.05)表达均明显降低。相对于pGenesil-1组,NTE-EGFP组NTEmRNA(p0.01)和蛋白(p0.001)表达均显著性增加。 (4)通过划痕实验和Transwell方法观察显示,相对于Blank组,pGenesil-1组和Control shRNA组HTR-8/SVneo细胞迁移和侵润能力均无明显变化(p0.05)。相对于Control shRNA组,NTE shRNA组HTR-8/SVneo细胞迁移和侵润能力均明显减弱(p0.01)。NTE-EGFP组相对于pGenesil-1组,HTR-8/SVneo细胞迁移和侵润能力均显著增强(p0.05)。 (5)MTS分析显示,在体外培养24h,36h,48h,相对于同时点各组,20%FBS阳性对照组,均明显促进HTR8/SVneo细胞的增殖(p0.01),而在体外培养1h,24h,36h,48h及72h,Blank组, pGenesil-1组, NTE-EGFP组,Control shRNA组,NTE shRNA组之间,HTR-8/SVneo细胞的增殖均无明显变化(p0.05)。 (6)通过明胶酶谱实验分析显示,转染后24h和48h,相对于未转染Bla-nk组, pGenesil-1组和Control shRNA组,HTR-8/SVneo分泌MMP-9均无明显变化(p0.05)。相对于Control shRNA组,NTE shRNA组HTR-8/SVneo细胞分泌MMP-9显著性减少(p0.01)。相对于pGenesil-1组,NTE-EGFP组HTR-8/SVneo细胞分泌的MMP-9明显增加(p0.05)。而各组之间,MMP-2表达均没有明显变化。 (7)ELISA方法分析显示,基因转染后24h和48h,Blank组、pGenesil-1组、NTE-EGFP组、Control shRNA组以及NTE shRNA组之间,HTR-8/SVneo细胞所分泌TIMP-1、TIMP-2量均无显著差异(p0.05)。 (8)Western blot检测显示,转染后48h,相对于未转染Blank组,pGenesil-1组和Control shRNA组,HTR-8/SVneo细胞ERK1/2和AKT磷酸化均无显著影响(p0.05)。相对于Control shRNA组,NTE shRNA组能显著抑制HTR-8/SVneo细胞ERK1/2磷酸化(p0.01)和AKT磷酸化(p0.05)。相对于pGenesil-1组,NTE-EGFP组明显促进HTR-8/SVneo细胞ERK1/2磷酸化(p0.01)和AKT磷酸化(p0.001)。 结论: (1)相对于正常妊娠的胎盘组织,在子痫前期胎盘组织中,NTE mRNA和蛋白的表达水平均明显下降。 (2)NTE通过MMP-9影响HTR-8/SVneo滋养层细胞的迁移和侵润。 (3)ERK1/2和AKT信号通路参与了NTE对HTR-8/SVneo滋养层细胞的调节。
[Abstract]:Objective:
Abnormal trophoblast invasion is an important link in the pathogenesis of preeclampsia, its etiology is still unknown. In recent years, research shows that neuropathy target esterase (neuropathy target, esterase, NTE) is closely related to the development of the placenta, phosphatidylcholine metabolism regulation, injection to pregnancy mice induced preeclampsia model, which is closely related with the trophoblast cells the invasion, suggesting that NTE may be involved in preeclampsia disease. This study was designed to investigate the expression of NTE in preeclampsia and its effect on trophoblast cell migration and invasion and the mechanism.
Method锛
本文编号:1509228
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