Kv7通道对子痫前期胎盘绒毛膜板动脉血管张力的影响及机制

发布时间：2018-02-28 11:03

本文关键词： 子痫前期胎盘血管平滑肌 Kv7通道　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过对比正常血压妊娠(Normotensive Pregnancy,NP)和子痫前期(Pre-clampsia,PE)胎盘绒毛膜板动脉(Placental Chorionic plate arteries,CPAs)上Kv7通道表达及其对血管张力调节功能的差异,探讨Kv7通道对子痫前期胎盘绒毛膜动脉血管张力的影响及可能的机制。方法:1、离体血管环张力实验:(1)检测不同浓度Kv7通道阻滞剂XE991(10-7-10-4mol/L)对NP组(n=10)和PE组(n=10)CPAs血管环基础张力的影响,并分析比较NP组和PE组CPAs血管在10-6、10-5、5x10-5mol/L不同浓度XE991作用下基础张力的变化;(2)检测不同浓度血管预收缩剂U46619(血栓素A2受体激动剂)(10-10-3X10-6mol/L)在无XE991预处理或有XE991预处理时对NP组(n=10)和PE组(n=10)CPAs血管环张力的影响,并分析比较NP组和PE组XE991对预收缩剂U46619收缩作用影响的差异;(3)检测不同Kv7通道开放剂Retigabine、BMS-204352、ICA-27243、ML277(10-7-10-4mol/L)对NP组(n=10)和PE组(n=10)U46619(10-7mol/L)预收缩CPAs血管环张力的影响;2、实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR experiment,QPCR):15例确诊为子痫前期并在我院终止妊娠孕妇为PE组,15例我院终止妊娠的血压正常孕妇为NP组,分离提取胎盘绒毛膜板动脉血管平滑肌总RNA,合成c DNA并进行SYBR Green荧光定量PCR反应,得到相应的Ct值,计算出ΔCt值(=目的基因Ct值-β-actin内参基因的Ct值),然后以NP组第一个样本为参照因子计算ΔΔCt(=目的基因Δct值-np1目的基因Δct值),2-ΔΔct处理后可进行相对表达量分析;3、westernblotting实验:np组和pe组标本各15例均来自定量pcr实验中研究对象,提取cpas血管平滑肌总蛋白并测定蛋白浓度,sds-page电泳后转至pvdf膜,抗体孵育后凝胶成像系统成像后保存图像,用quantity-one软件测量灰度值,以目的蛋白与内参β-actin蛋白灰度值比值作为该目的蛋白的相对表达量。实验结果以均数±标准差(x±s)表示,采用spss11.0和graphpadprism5.0软件进行统计分析。结果:⑴.离体血管环实验结果:(1).kv7离子通道非特异阻断剂xe991(10-7-10-4mol/l)能浓度依赖性的升高np组(n=10)cpas血管环的基础张力,与dmso(二甲亚砜溶剂)对照组比较差异具有统计学意义(n=10,Δp0.05,**p0.01,***p0.001,two-wayanova);在5x10-5mol/l时张力变化百分比达最大,为44.67±9.52%,在10-4mol/l时出现明显舒张反应,张力下降达29.61±6.47%左右。kv7离子通道非特异阻断剂xe991(10-6,10-5,5x10-5m/l)收缩pe组(n=10)cpas血管环的作用较np组明显减弱,差异具有统计学意义(n=10,*p0.01,***p0.001,two-wayanova)。(2).对np组来说,未加xe991预处理时,预收缩剂u46619(10-10-3x10-6mol/l)能浓度依赖性的收缩cpas血管环,与dmso对照组比较差异具有统计学意义(n=10,**p0.01,two-wayanova);加10-5mol/lxe991孵育后,u46619(10-10-3x10-6mol/l)各浓度引起的张力变化百分比均较未用xe991孵育明显增加,差异具有统计学意义(n=10,*p0.05,**p0.01,two-wayanova)。对pe组来说,加10-5mol/lxe991孵育后,u46619在10-8、10-7、10-6mol/l浓度引起的cpas血管环张力变化百分比较未加10-5mol/lxe991孵育相比差异不大,不具有统计学意义(n=10,Δp0.05,two-wayanova)。(3).np组:与dmso对照组相比,kv7通道开放剂retigabine(n=10)、bms-204352(n=10)(10-9~10-4mol/l)均能浓度依赖性的舒张u46619(10-7mol/l)预收缩的cpas血管环(差异具有统计学意义,**p0.01、***p0.001,two-wayanova),但ica-27243(n=10)、ml277(n=10)对u46619(10-7mol/l)预收缩的血管环张力无影响(差异没有统计学意义,Δp0.05、Δp0.05,two-wayanova)。pe组:与np组对比,retigabine(n=10)、bms-204352(n=10)(10-9~10-4mol/l)舒张u46619(10-7mol/l)预收缩的cpas血管环的能力明显减弱(差异具有统计学意义,Δp0.05,*p0.05,**p0.01,***p0.001,two-wayanova);ica-27243(n=10)(10-9~10-4mol/l)在10-5mol/l和10-4mol/l浓度能舒张cpas血管环(差异具有统计学意义,*p0.05,two-wayanova)。ml277对u46619(10-7mol/l)预收缩的cpas血管环的舒张作用不明显(差异不具有统计学意义,Δp0.05,two-wayanova)。⑵.np组(n=15)和pe组(n=15)两组比较发现基因kcnq1、kcnq2、kcnq3、kcnq4、kcnq5的mrna相对表达量分别是:1.1148±0.0351、1.0172±0.0247、1.0337±0.0224、1.0223±0.0473、1.0280±0.0510和1.1017±0.0547、0.9993±0.0589、1.7448±0.0678、0.1123±0.0117、0.1133±0.0129;而且与np组相比,kcnq1和kcnq2的mrna的表达水平差异不具有统计学意义(Δp0.05,Δp0.05),基因kcnq3、kcnq4和kcnq5的mrna的表达水平差异具有统计学意义(***p0.01、***p0.01、***p0.01);pe组基因kcnq3的mrna表达水平明显上调,基因kcnq4和kcnq5的mrna表达水平明显下调。⑶.np组(n=15)KCNQ3-5的蛋白相对表达量分别是:0.1845±0.032、0.6147±0.0426、0.5738±0.0192,PE组(n=15)KCNQ3-5的蛋白相对表达量分别是:0.5083±0.0377、0.2657±0.0461、0.2594±0.0587,三者之间两两比较差异明显,具有统计学意义(***P0.01、***P0.01、***P0.01);与NP组相比,PE组基因KCNQ3的蛋白表达水平明显上调,基因KCNQ4和KCNQ5的蛋白表达水平明显下调。结论:1.Kv7通道参与调节正常血压妊娠的胎盘绒毛膜板动脉血管张力;与正常血压妊娠相比,Kv7通道调节子痫前期的胎盘绒毛膜板动脉血管张力的能力明显减弱;2.与正常血压妊娠相比,子痫前期妊娠妇女CPAs血管平滑肌上KCNQ1、KCNQ2的mRNA表达差异不明显,KCNQ3亚型的mRNA及蛋白表达明显上调,KCNQ4、KCNQ5的mRNA及蛋白表达明显下调;3.Kv7离子通道调节子痫前期绒毛膜板动脉张力的能力明显减弱主要与KCNQ4和KCNQ5亚型表达下调有关;4.KCNQ3通道可能参与调节子痫前期妊娠妇女的CPAs血管的舒张,即KCNQ3通道的表达及功能的转变可以看作是KCNQ4/KCNQ5通道舒张子痫前期CPAs血管平滑肌作用减弱后的补偿机制。
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【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R714.244

【参考文献】