MiR-204降调Caveolin-1表达降低HRGECs对大分子蛋白的通透性

发布时间：2018-03-01 18:24

  本文关键词： miR- Caveolin- 肾小球内皮细胞 屏障障碍 蛋白尿　出处：《现代妇产科进展》2017年04期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的:探讨miR-204对肾小球内皮细胞(HRGECs)通透性及Caveolin-1(CAV1)表达的影响。方法:利用生物信息学方法预测以CAV1为靶基因的miRNA,miR-204为CAV1表达的调节miRNA。分别用子痫前期(PE)患者血清和正常血清处理HRGECs,q PCR法检测miR-204表达水平。将体外培养肾小球内皮细胞(HRGECs)分为4组:过表达组(转染miR-204 mimic),降表达组(转染miR-204 inhibitor),转染miR-204mimic NC(mimic阴性对照组)和转染miR-204 inhibitor NC(inhibitor阴性对照组)。转染48h后,荧光定量PCR及Western blot法检测miR-204及CAV1 mRNA和蛋白表达水平,Evans-blue检测HRGECs单层细胞对大分子蛋白的通透性改变。结果:PE血清可抑制HRGEC中miR-204表达(P0.05)。荧光定量PCR和Western blot结果显示,与阴性对照组比较,miR-204过表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);miR-204降表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与阴性对照组比较,miR-204过表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性降低,miR-204降表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性提高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:miR-204可能通过抑制CAV1转录后翻译从而调节其靶基因CAV1表达,进而影响肾小球内皮细胞通透性,miR-204可能参与PE患者肾小球内皮细胞尿蛋白形成的调节。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of miR-204 on the permeability of HRGECs and the expression of Caveolin-1 (CAV1) in glomerular endothelial cells. Methods: bioinformatics was used to predict the regulation of miRNA-miR-204 CAV1 expression targeting CAV1 gene. Serum and positive miRNAs of patients with preeclampsia were used respectively. In vitro cultured glomerular endothelial cells were divided into four groups: overexpression group (transfection of miR-204mimic miR-204 inhibitor, miR-204mimic NC(mimic negative control group) and miR-204 inhibitor NC(inhibitor negative group. In control group, 48 h after transfection, Fluorescence quantitative PCR and Western blot were used to detect the expression of miR-204 and CAV1 mRNA and protein. Evans-blue was used to detect the permeability of HRGECs monolayer cells to macromolecular proteins. There was no significant difference in the expression of CAV1 mRNA between the control group and the negative control group. There was no significant difference in the expression of CAV1 mRNA between the two groups. Compared with the negative control group, the permeability of HRGECs to macromolecular protein in the overexpression group was lower than that in the down-expression group, and the permeability of HRGECs to the macromolecular protein in the down-expression group of miR-204 was higher than that in the negative control group. Conclusion the CAV1 expression of the target gene may be regulated by inhibiting the post-transcriptional translation of CAV1, thus affecting the permeability of glomerular endothelial cells and the regulation of urinary protein formation of glomerular endothelial cells in PE patients.
【作者单位】： 上海交通大学附属第六人民医院妇产科产科重症监护中心妇产科研究所;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No:81570444) 国家科技部“十二五”支撑计划项目(No:2014BAI05B05)
【分类号】：R714.2

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本文编号：1553048