miRNA及miRNA作用靶点基因多态性与盆腔器官脱垂易感性关联研究

发布时间：2018-03-29 09:12

本文选题：盆腔器官脱垂(POP)　切入点：microRNA(miRNA)　出处：《福建医科大学》2014年博士论文

【摘要】：目的拟通过病例-对照研究,探讨位于microRNA(miRNA)编码区和miRNA作用靶点的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)与盆腔器官脱垂(Pelvic Organ Prolapse,POP)遗传易感性的关系;根据POP遗传易感性的分析结果,检测阳性关联位点不同基因型样本阴道壁组织中信使RNA(Messenger Ribonucleic Acid,mRNA)和目的蛋白的表达,从转录水平及翻译水平阐述阳性关联位点与POP发生的关系及其生物学意义;并综合分析遗传因素与环境因素的交互作用对POP发病风险的影响;旨在为POP的预防、诊断和治疗提供理论依据。方法1、收集2012年3月至2013年3月就诊于南京军区福州总医院妇产科的291例盆腔器官脱垂病例,并以年龄、居住地为匹配因素,纳入同期300例健康对照者。采集每一研究对象的外周血2ml,对于POP行手术的病例同时采集其阴道壁组织。2、通过查阅文献和生物信息学软件分析筛选了位于mi R-146a(rs2910164)、miR-196a-2(rs11614913)、miR-149(rs2292832)、mi R-499(rs3746444)编码区和位于COL1A1(rs1061947)、COL1A1(rs1061237)、MMP1(rs2071230)、MMP1(rs470215)、MMP1(rs5854)、MMP2(rs7201)、MMP9(rs9509)、MMP9(rs1056628)、LOXL1(rs3522)3’端非翻译区(3’Untranslated Region,3’UTR)的miRNA结合靶点的基因多态性位点,采用MassARRAY时间飞行质谱等技术检测各个SNP位点的基因型。统计分析均使用SPSS17.0软件,采用χ2检验分析各位点基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡,及两组的基因型分布频率;采用logistic回归分析评价pop遗传易感性与各个多态性位点的关系;采用分层分析的方法分析体重指数、绝经情况及阴道分娩情况与各个snps位点之间的交互作用对pop发病风险的影响。3、采用realtime-pcr和westernblotting方法检测col1a1及mmp1基因在不同基因型样本的阴道壁组织中mrna和蛋白的表达。结果1.mirna编码区的snps与盆腔器官脱垂发病风险的分析结果:位于mir-196a-2的基因多态性位点(ccvstt)与pop的发病风险增加显著相关(or=2.00,95%ci:1.19-3.36,p=0.009);分层分析表明,该位点与绝经者(ccvstt,or=2.13,95%ci:1.11-4.08,p=0.024和cc/ctvstt,or=1.60,95%ci:1.01-2.55,p=0.047)、有阴道分娩史者(ccvstt,or=2.26,95%ci:1.10-4.63,p=0.026)、体重指数(bodymassindex,bmi)≥23.5的人群中(ccvstt,or=2.48,95%ci:1.16-5.32,p=0.019和cc/ctvstt,or=2.00,95%ci:1.14-3.51,p=0.016)的pop发病风险显著增加。位于mir-146a多态性位点的(ccvstt)在未绝经人群中pop发病风险显著降低(or=0.09,95%ci:0.01-0.81,p=0.031)。位于mir-499多态性位点的(cc/ctvstt)在bmi≥23.5人群中与pop发病风险显著相关(or=1.77,95%ci:1.03-3.04,p=0.038)。2.mirna作用靶点的snps与盆腔器官脱垂发病风险的分析结果:位于col1a1基因的3’端非翻译区的多态性位点rs1061237(ttvscc)的pop的发病易感性显著降低(or=0.59,95%ci:0.37-0.95,p=0.031);分层分析发现,该位点在无阴道分娩史人群与pop发病风险降低显著相关(ttvscc,or=0.38,95%ci:0.18-0.79,p=0.009和ct/ttvscc,or=0.48,95%ci:0.27-0.87,p=0.016)。位于mmp-1基因的3’utr区多态性位点rs470215(ag/ggvsaa)与pop发病风险显著增加相关(or=2.01,95%ci:1.16-3.51,p=0.013),但由于该位点在本研究中所测得的最小等位基因频率(minimumallelefrequency,maf)0.05,为了提高统计效率,该位点未进行分层分析。位于mmp-1基因的3’utr区的多态性位点rs5854与pop的发病风险增加显著相关(ttvscc,or=2.76,95%ci:1.20-6.38,p=0.017和ct/ttvscc,or=1.87,95%ci:1.08-3.24,p=0.025);分层分析发现,该位点在绝经人群(ct/ttvscc,or=2.05,95%ci:1.08-3.87,p=0.028和ttvscc,or=3.37,95%ci:1.27-8.94,p=0.015)、有阴道分娩史人群(ct/ttvscc,or=2.21,95%ci:1.12-4.36,p=0.022和ttvscc,or=3.95,95%ci:1.43-10.79,p=0.007)、bmi≥23.5人群中(ct/ttvscc,or=2.44,95%ci:1.06-5.61,p=0.036和ttvscc,or=4.43,95%ci:1.21-16.18,p=0.024)的pop易感性显著增加。位于mmp-1基因3’utr的多态性位点rs2071230(ga/ggvsaa)在未绝经人群中的pop的易感性显著降低(or=0.37,95%ci:0.19-0.72,p=0.003)。对位于同一染色体上的位点进行连锁不平衡分析发现,这些位点之间均不存在连锁不平衡关系。3.rs1061237位点三种基因型的pop患者阴道壁组织中col1a1基因mrna表达水平三组差异没有统计学意义(p0.05);而在蛋白表达水平,tt基因型的样本中col1a1蛋白表达明显高于ct基因型和cc基因型组。提示位点rs1061237可能是在转录后水平发挥作用。4.rs5854位点三种基因型的pop患者阴道壁组织中mmp1基因的mrna表达水平三组差异无统计学意义(p0.05);而蛋白表达水平,tt基因型的样本中mmp1蛋白表达最高,ct基因型次之,cc基因型样本的表达量最低,差异有统计学意义。提示位点rs5854可能是在转录后水平发挥作用。结论1.位于mir-196a-2编码区的基因多态性位点与pop的遗传易感性增加有关;该位点与bmi、阴道分娩史、绝经情况存在交互作用;位于mir-146a编码区的多态性位点与绝经情况存在交互作用;位于mir-499编码区的多态性位点可以通过与bmi发生交互作用,影响pop发病风险。2.位于col1a1基因的3’utr区多态性位点rs1061237与pop的发病易感性降低有关,该位点与阴道分娩情况之间存在交互作用;位于mmp-1基因的3’utr区多态性位点rs470215与pop的发病易感性增加有关;位于mmp-1基因的3’utr区的多态性位点rs5854与pop的发病风险增加相关,该位点与bmi、阴道分娩史、绝经情况存在交互作用;位于mmp-1基因3’utr的多态性位点rs2071230可以通过与绝经情况发生交互作用,影响pop的发病风险。因此,rs1061237的TT基因型和rs5854的TT基因型有望成为预测POP遗传易感性的重要指标。3.COL1A1(rs1061237)多态性位点可能通过影响miR-3119与COL1A1基因3’UTR靶位点的结合能力,影响miR-3119对COL1A1的调控,导致COL1A1蛋白表达的增加,从而降低了POP的发病风险。4.MMP1(rs5854)多态性位点可能通过影响该区域内的miRNA与MMP1基因3’UTR靶位点的结合能力,影响miRNA对MMP1的调控,导致MMP1蛋白的表达增加,而参与POP的发病。
[Abstract]:Objective To study the relationship between single nucleotide polymorphism ( SNP ) and genetic susceptibility of pelvic organ prolapse ( POP ) , which was located in the non - translational region ( rs2910164 ) , MMP1 ( rs11614913 ) , MMP1 ( rs9509 ) , MMP1 ( rs5854 ) , MMP2 ( rs7201 ) , MMP1 ( rs9509 ) , MMP1 ( rs1056628 ) , MMP2 ( rs3522 ) 3 ' terminal untranslated region ( rs2292832 ) , MMP1 ( rs3746444 ) . The risk of pop was significantly associated with pop ( or = 2.00 , 95 % ci : 1.03 - 3.04 , p = 0.031 ) at the 3 ' - untranslated region of the col1a1 gene ( or = 2.48 , 95 % ci : 1.16 - 5.32 , p = 0.026 , 95 % ci : 1.18 - 0.79 , p = 0 . 009 and ct / ttvscc , or = 0.48 , 95 % ci : 0.27 - 0.87 , p = 0.031 ) .

【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R711.2

【参考文献】